第３２卷第５期 ２０１０年５月 中国预防兽医学报 ＶＯ１．３２．ＮＯ．５ Ｍａｙ．２０１０ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 商品蛋鸡Ｊ亚群禽白血病病毒分离鉴定及序列分析 吴晓平，钱 琨，秦爱建 ，王平平，沈海玉，邵红霞，金文杰 （扬州大学兽医学院，江苏扬州２５５００９） 摘要：为了解商品蛋鸡群中Ｊ亚群禽白血病病毒（ＡＬＶ．Ｊ１流行情况和病毒特性，本实验对感染血管瘤与髓 细胞瘤混合型ＡＬｖ—Ｊ的商品海兰褐蛋鸡进行了病毒分离，对２个分离株的致瘤关键基因序列ＬＴＲ与ｇｐ８５进行了 测定，并与参考毒株进行比对，分析结果表明这两株病毒的ＬＴＲ及ｇｐ８５均存在显著的变异。在这两个基因的遗 传进化树中均形成一个单独的分支：ＬＴＲ的Ｕ３序列与参考毒株的同源性低至８９．７％～９２．４％，而参考毒株之间 的同源性高达９０．７％～９９．６％，这两株病毒的Ｕ３区变异产生了一个与肿瘤形成与转移间接相关的元件 ＴＣＦ１１（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ ｌｌ１，但Ｙ ｂｏｘ、ＴＡＴＡ ｂｏｘ、ＣＡｒＧ ｂｏｘ都很保守；两株病毒的ｇｐ８５氨基酸序列均在第 １７９位缺失一个Ｌｙｓ，两个毒株的ｇｐ８５蛋白序列与肉鸡分离毒株之间的同源性很低，为８６％－－８９％，而与参考 蛋鸡分离毒同源性相对较近，为８９．２％。本研究证实从多种肿瘤类型并发的蛋鸡自然发病病例中分离到ＡＬＶ．Ｊ 病毒，其关键序列发生了显著的变异。 关键词：商品蛋鸡；Ｊ亚群白血病病毒；分离鉴定；序列分析 中图分类号：￥８５２．６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８—０５８９（２０１０）０５—０３５１－０５ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｌａｙｅｒ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｗｕ Ｘｉａｏ—ｐｉｎｇ，ＱＩＡＮ Ｋｕｎ，ＱＩＮＧ Ａｉ－ｊｉａｎ ，ＷＡＮＧ Ｐｉｎｇ—ｐｉｎｇ，ＳＨＥＮＧ Ｈａｉ—ｙｕ， ＳＨＡＯ Ｈｏｎｇ—ｘｉａ，ＪＩＮ Ｗｅｎ－ｊｉｅ ｆＣｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ ２２５０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｉｖｅ ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＡＬＶ—Ｊ）ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｂｒｏｗｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｄ ｈｅｍａｎｇｉｏｍａ ｉｎ Ｊｉａｎｇｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ．ＤＮＡ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ（ＬＴＲ）ａｎｄ ｇｐ８５ ｇｅｎｅ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｔｈｅ Ｕ３ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ８９．７％ｔｏ ９２．４％ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｓｐｅｃｉａｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｆｏｒ ＴＣＦ １ １（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ １ １）ｉｎ Ｕ３ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｉｓｏｌａｔｅｓ，ｂｕｔ ｔｈｅ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｗｅｌｌ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｙ ｂｏｘ，ＣＣＡＡＴ—ｌｉｋｅ ｂｏｘ，ＰＲＥ ｂｏｘ，ａｎｄ ＣａｒＧ—ｌｉｋｅ ｂｏｘ．Ｂｏｔｈ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ａｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ（Ｌｙｓ）ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｉｎ ｈｒｌ ｒｅｇｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｇｐ８５ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ８６．０％ｔｏ ８９．０％ｉｄｅｎｔｉｙ ｔｏ ｒｅｆｔｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｒｏｍ ｂｏｉｌｅｒ ｃｈｉｃｋｅｎｓ．ａｎｄ ８９．２％ｉｄｅｎｔｉｙ ｔｏ ｉｔｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｌａｙｅｒ ｃｈｉｃｋｅｎｓ．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｓｉｎｉｆｇｉｃａｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｃｃｕｒｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｋｅｙ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＬＶ—Ｊ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｕｍｏｒ ｔｙｐｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｌａｙｅｒ ｃｈｉｃｋｅｎ；ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｕｓ；ｉｒｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ；ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ 鸡源禽白血病病毒（Ａｖｉｏｃｎ ｌｅｎｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ＡＬＶ） 禽白血病病毒（ＡＬＶ．Ｊ）可能是外源ＡＬＶ和内源性病 毒ＥＡＶ—ＨＰ重组而来［２－３１。ＡＬＶ．Ｊ在世界范围内普遍 分为６个亚群，Ａ—Ｅ和Ｊ亚群…。资料表明，Ｊ亚群 Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ 收稿日期：２００９—１２—０１ 基金项目：国家基金重点项目（Ｕ０８３１００２）；国家行业专项（２００８０３０１９） 作者简介：吴晓平（１９７８．），女，山东莱州人，博士研究生，主要从事ＡＬＶ ｘ－￣ＮＮ通信作者：Ｅ—ｍａｉｌ：ａｉｊｉａｎ＠ｙｚｕ．ｅｄｕ．ｃａ 血病病毒研究 ３５２ 中国预防兽医学报 ２０１０年 存在，感染后产生肿瘤，死亡率高，往往给养鸡业 造成巨大经济损失【４］。目前，还没有遗传抵抗 ＩＦＡ检测阳性的样本感染后的ＤＦＩ细胞总ＤＮＡ，进 行ＡＬＶ．Ｊ特异性ＰＣＲ扩增，根据ＡＬＶ—Ｊ原型株 ＨＰＲＳ１０３全序列（Ｚ４６３９０）设计两对引物，分别扩增 ＬＴＲ序列和ｇｐ８５序列。用于扩增ＬＴＲ序列的上游 ＡＬＶ．Ｊ的鸡品种，不同品系对于肿瘤发生的抵抗性 不同，其中肉鸡显著易感。以往的研究表明，商品 来航鸡对该病毒易感，但不易形成肿瘤。１９９９年首 次报道中国地区ＡＬＶ—Ｊ毒株分离以来，ＡＬＶ—Ｊ不断 从白羽肉鸡群向地方鸡群和蛋用鸡群传播。近年 来，在中国地方鸡种如黄羽肉鸡和中国麻鸡中陆续 弓Ｊ物Ｆｌ：５’．ＴＧＴＡＧＴＧＴＴＡＴＧｃＡＡＴＡｃＴ．３’，下沩芋弓Ｉ 物Ｒ１：５’一ＴＧＡＡＧｃｃＡＴｃｃＧｃＴＴｃＡ．３’，分别位于原 型株ＨＰＲＳ１０３的１位～１９位和３０９位～３２５位，用 于扩增ＬＴＲ序列，目的片段长度为３２５ ｂｏ；用于扩 有ＡＬＶ．Ｊ病例的报道 ，以及ＡＬＶ—Ｊ感染商品蛋鸡引 起髓细胞瘤［７１、血管瘤与成髓细胞瘤的病例报道＿８］。 ＡＬＶ．Ｊ的发病情况和临床表现复杂化和多样化，混 合感染严重［９］，对ＡＬＶ—Ｊ的防疫提出了严峻的考验。 为了对商品蛋鸡群中ＡＬＶ．Ｊ流行情况和病毒特性进 行研究，本实验对前期经过组织病理学研究和分子 诊断确定为血管瘤与髓细胞瘤混合型ＡＬＶ—Ｊ感染的 商品海兰褐蛋鸡进行了病毒分离，并对分离株的致 瘤关键基因序列ＬＴＲ与ｇｐ８５进行了测定和分析， 证实了引起多种肿瘤并发的ＡＬＶ—Ｊ其致瘤关键序列 存在显著的变异。 １ 材料和方法 １．１ 细胞和试剂对Ｅ亚群ＡＬＶ有抵抗力的０系 鸡成纤维细胞系ＤＦ１细胞，以及针对ＡＬＶ—Ｊ囊膜蛋 白的特异性单克隆抗体（ＭＡｂ）ＪＥ９ Ｊ均为本实验室保 存。ＦＩＴＣ标记的山羊抗鼠ＩｇＧ购自Ｓｉｇｍａ公司；胎 牛血清购于北京欣经科生物技术有限公司；ＭＥＭ 粉剂培养基购ＧＩＢＣＯ公司；胰蛋白酶购于生化 研究所。 １．２质粒与菌株ｐＧＥＭ．Ｔ载体购自宝生物工程 （大连）有限公司；ＤＨ５仅菌株为本实验室保存。 １．３病毒分离及鉴定病鸡的脾脏用ＰＢＳ以１：４体 积比研磨，制成悬液；在悬液中加入青链霉素各 １０００ ＩＵ／ｍＬ；３７℃水浴３０ ｍｉｎ；３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心 １５ ｒａｉｎ，取上清液。参照文献［１１］以原液和１：５稀释 分别接种到单层ＤＦ１细胞上，感染３ ｈ后，换含有 １％小牛血清的ＤＭＥＭ培养基，于３７℃５％ＣＯ 培养箱中培养并维持７ ｄ；而后用０．２５％胰酶消化 并传代，进行病毒分离。 １．４间接免疫荧光检，￣Ｊ（ＩＦＡ）主要参照文献［１ １】的 方法进行。 １．５ ＬＴＲ及ｇｐ８５序列扩增与测定分别提取上述 增ｇｐ８５序列的上游引物Ｆ２：５＇－ＡＴＧＡＧＧＣＧＡＧＣＣＣ ＴＣＴＣＴＴＴＧ．．３，下游引物Ｒ２：５＇－ＧＣＧＣＣＴＧＣＴＡＣＧ ＧＣＧＧＴＧ．．３，分别位于原型株ｅｎｖ序列的１位～２１ 位和１ １０４位～１ １２２位，目的片段长度为１ １２２ ｂｐ。 反应程序为：９５℃５ ｍｉｎ；９４℃３０ Ｓ、６０℃１ ｍｉｎ、 ７２℃１ ｍｉｎ，２个循环；之后每两个循环退火温度 降１℃，直至退火温度为４６℃，在此退火温度上 循环２５个循环，７２℃延伸１０ ｒａｉｎ。ＰＣＲ产物经过 电泳鉴定后，用Ａｘｙｇｅｎ的胶回收试剂盒回收目的 片段，与ｐＧＥＭ—Ｔ １６℃连接３ ｈ以上，转化感受态 ＤＨ５ 大肠杆菌，挑取白色克隆菌落，经酶切鉴定 正确后，每个序列随机挑选２个克隆的质粒ＤＮＡ 送上海英骏公司测序，以保证序列的正确性。通过 ＤＮＡＳｔａｒ ７．０进行序列比对和分析。应用ＫＥＧＧ （Ｋｙｏｔｏ ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅｓ）序列数据库 （ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅｓ．ａｄ）ＭＯＴＩＦ检索分析服务系统 （ＭＯＴＩＦ—Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｍｏｔｉｆ ｓａｒｃｈ），对ＡＬＶ．Ｊ的ＬＴＲ转 录区作用元件进行定位分析。 ２ 结 果 ２．１ 病毒分离鉴定经病料接种感染的ＤＦ１细胞 培养７ ｄ，细胞经丙酮乙醇固定后，以ＡＬｖ．Ｊ特异 性ＭＡｂ ＪＥ９作为一抗，以ＦＩＴＣ标记的山羊抗鼠 ＩｇＧ作用后，观察荧光，可见胞浆中特异性绿色荧 光，胞核无荧光（图１显示为ＪＳ０９ＧＹ３毒株感染 ＤＦ１的ＩＦＡ结果）。证实从病鸡的脾脏样品中分离到 ＡＬＶ—Ｊ，对培养分离到的５株病毒，分别命名为 ＪＳ０９ＧＹ２～ＪＳ０９ＧＹ６。 ２．２ 病毒ＬＴＲ及ｇｐ８５序列的ＰＣＲ扩增 以 ＪＳ０９ＧＹ３和ＪＳ０９ＧＹ６感染的ＤＦ１细胞总ＤＮＡ为模 板，应用设计的两对特异性引物ＦＵＲ１和Ｆ２／Ｒ２，分 别扩增出两株病毒的ＬＴＲ（图２Ａ）及ｇｐ８５（图２Ｂ）基 因片段，如图２所示在约３００ ｂｐ和１ １００ ｂｐ处有清 第5期吴哓平，等商品蛋鸡．J亚群禽白血病病毒分离鉴定及序列分析353晰的DNA。片段，阴性对照DFl细胞基因组PcR与002USA2004974USA2004993USA2004—．预期相符G窖aIlusR0usAssocj8tedVjrustyD0sassOcjatedvinstvDeIRG矗GgalluR0us95：lUSA2004973USA2004ADoL7375USA200lADoL4817USA200lADoL734JLJSA200lJS09GY3JS09GY6ADoL750lUSA2003。‘—一一一一TM7USA2003HPRSl03UK1995YZ9902China1999AB：ALVJisoIateflrom—Iayerchickensce；：NegatjVecOntralOfnornl副DFl“sTM4USA2003SD990lC11ina1999YZ990IChina1999SD07LKlChjna2007952USA200498-4USA2004982USA2004992USA2004922USA200493lUSA2004AvjanewlhrobIas￡os括口m——，virus图Fl．感染病毒的删cDFl)(】×)细胞间接免疫荧光检测结果(4【c×图F3u3区序列进化树分析0nig1ation0fAIlV—JisolalcsinDFlmonocl伽e】lsbym～w曲ig-3Phylog∞etic缸ecb勰cdJS09GY6蛆u3ceseqIleⅡcesofJS09GY3，Ial衄曲odyJE9(400)drefc髓鼬cains：?等等譬髻盱j哥p蠢魏曩一一一譬¨擎篓臻一生：ⅢⅢ㈦}叠蓦孙川；越舞!曰：Lq鼍偻蒌r譬赁葺：：：：：}i：：b：b警嚣苗—叫：：：：：．．．．L．．．．Ln．．．．．．．．．．．．．．．．1．．．1．．．．E㈠一罢㈠一点_÷}Ⅲ—土。蒸霉蠹～．卅¨土_'¨～：鼍譬l警鬻麓置等量¨．．．．．．．．．L，．．．．．．．．A：PCRamcationp¨ofLTRf}ag：3：DmentOf，M：DL2000；lce：JS09GY32B：PC：JS09GY6nNANonnaIDFIlls紫黧羚熏置羔乳甲羔■一㈠～善。曩※重0黔至蠢董蓦蓦垂垂Ramplicatio2Ofgp85frag：3：DNment0，M：DL2000；1：JS09GY3ce一㈠㈡一F卜～：JS09GY6AfNOnnalDFllls蜀引川圳■gp85图2FPCR．扩增Js09GY3和JS09GY6的a趾LTR与序列soig2PCR唧蛐cati0Ⅱ0ftheUmnd印85s。哪fJS供IaY3dJS09(n佑图4u3区元件的分析o23。病毒LTRLTR序列分析，病毒的LTR序列中R区u5Fig24．．4删f蛳f雠U3蚓0n缸咖t在中保守性最高，各毒株序列完全相同；5病毒gp85序列分析，对于gp85gp85的氨基酸序列区相对保守两株病毒的u980％．区与参考病毒相应序分析可见这两株病毒之问的；序列同源性较列的同源性在～100％之间。高，，为973％．．而两株病毒与原型株之问的同源性而通过u3的序列同源性分析显示两个分离则为3％，与其它参考肉鸡分离毒(包括黄利肉860％．株Js09GY3．和Js09GY6的u3u3区序列之问同源性很鸡分离毒)的同源性低至发现，～8％．。同时分析和高(99突变6％)．。但两株病毒的和916％．区与原型株的同源性19两株病毒与参考蛋鸡分离毒之间的同源性也不高gp85，sD07LKl．分别为，924％，分别有个和u3。20个替换sD07LK2仅为887％179。保守性较低。这两株病毒的7％．序列与其它而参考毒株这两株病毒均在其个Lys序列的第gp85位发生一参考毒株的同源性为～924％．缺失，相比较与原型株的38氨基酸序列，之间的同源性相对较高，在一90．3％～996％之．问。这。这两个毒株分别含有高达和39个氨基酸替换突h1两株病毒在进化树中属于通过MOTIF个较为的分支(图3)变，突变率为。10％，，替换突变主要分布在gp85和h2分析，表明，Js09GY3和Js09GY6x、区域内另外这两株病毒的一序列的信号肽序的一u3区虽然变异较大TATAbo，但是其中两个boxcArGbo列与原型株完全致。，这在参考毒株中以及以前的这两株病毒的一个x、两个Y及PREbox等元104报道中也比较少见}14]件均保守存在一同时在u3的位～116位F，产生了tor通过遗传进化树分析表明，gp85，个特殊的结合位点，TCFll(Transcriptionacl1)”。氨基酸序列在遗传进化树中属于与其它毒株的遗传距离较远(图5个的分支(图4)这个结合位点问接与肿瘤生成及转移相关㈣)。３５４ 中国预防兽医学报 ＨＰＲＳ】０３ ｆＵＫ ｌ９９５ Ｍｅａｔ—ｔｙｐｅ） ＬｊＤ４ ｆＵＳＡ ２００ｌ Ｍｅａｔ，１）ｐｅ） ＩｊＤ５ （ＵＳＡ ２００１ Ｍｅａｔ．ｔｙｐｅ） ＮＸＯｌＯ１ （Ｃｈｉｎａ ２００ｌ Ｍｅａ１ ｔｙｐｅ１ ＡＤＯＬ Ｈｃ一１ ｌＵＳＡ ２００ｌ Ｍｅａｔ－ｔｙｐｅ） ＡＤｏＬ—Ｒ５—４ ｆＵＳＡ １９９９ Ｍｅａｔ ｔｙｐｅ） ＩｊＤ２ ｆ［ＩＳＡ ２００ｌ Ｍｅａｔ—ｔｙｐｅｌ ＧＤ０６ＳＬ ｌ ｆＣｈｉｎａ ２００６ Ｙｅｌｌｏｗ） ＧＤＯ６ＳＬ３ ｆＣｈｉｎａ ２００６ Ｙｅｌｏｖ￣ｌＪ ＵＤ３ （ＵＳＡ ２００１ Ｍｅａｔ—ｔｙｐｅ１ ＧＤ０６ＳＬ４ ｆＣｌｌｉｎａ ２００６ Ｙｅｌｋ）ｖ． ＳＤ０７ＬＫ Ｉ （Ｃｈｉｎａ ２００７ Ｌａｙｅｒ１ ＳＤ０７ＬＫ２ ｆＣｈｉｎａ ２００７ Ｌａｙｅｒ１ ＪＳ０９ＧＹ３ （Ｃｈｉｎａ ２００９ Ｌａｙｅｒ） ＪＳ０９ＧＹ６ 【Ｃｈｉｎａ ２００９ Ｌａｙｅｒ） ＡＤｏＬ・７５０１ ｆＵＳＡ ２００３ Ｍｅａｔ，ｔｙｐｅ１ 图５ ｇｐ８５氨基酸序列进化树分析 啦．５啦 慨ｏｆｇｐ８５ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｇｏｑｕｏｎｃ￣８ ｏｆＪＳ０９ＧＹ３， ９（ ｒ６ ａｎｄ ｒｅｆｅｒｅｎ￣ｓａ－ａｉｎｓ ３讨 论 ＡＬＶ．Ｊ主要感染肉鸡，蛋鸡较少发病。２００４年 徐镔蕊首次报道商品蛋鸡感染ＡＬＶ．Ｊ 。近年来ＡＬＶ—Ｊ 在中国地区的商品蛋鸡中不断有新病例出现［８，１５－１７】。 主要的肿瘤形式类似于白羽肉鸡的髓样细胞瘤（ＭＬ） 和血管瘤［ｓ３７１。本次研究中发现的商品蛋鸡感染病例 却呈现多样的肿瘤类型，主要表现为血管瘤和髓细 胞瘤，感染情况更加复杂严重。这提示ＡＬＶ—Ｊ在商 品蛋鸡中传播，临床肿瘤表现越加多样化、复杂 化。 基因功能分析表明，ＬＴＲ中Ｕ３区在肿瘤的类 型和发生中有重要影响和作用，ＡＬＶ和ＲＳＶ的 ＬＴＲｓ是强转录增强子和启动子单位，可以在许多细 胞类型中利用细胞内的转录因子达到高水平的转 录。本实验中所分离的病毒其ｕ３区的变异明显， 但主要的ＡＬｖ。Ｊ元件则保守存在。比较特殊的 是，两株病毒的Ｕ３区变异均产生了一个ＴＣＦ１１的 结合位点，这个元件在参考毒株中没有发现， 转录因子ＴＣＦ１１与肿瘤产生及转移间接相关。特殊 的元件的产生，可能会对病毒的转录、复制产 生影响，而此元件的作用还需后续实验证实。 ｅｒｌｖ基因也是ＡＬＶ．Ｊ致肿瘤性的关键因素 ］， 反转录病毒的囊膜蛋白作为配体和受体结合，病毒 对于不同谱系组织细胞的亲嗜性可能和不同细胞类 型表面的病毒受体分布有关，因此病毒的囊膜蛋白 对于病毒的组织嗜性有重要影响［１９－２ｏ１。同属反转录 病毒的人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）囊膜糖蛋白基因第３高 变区（Ｖ３环）的变异与ＨＩＶ１的细胞嗜性、复制动力 学和细胞致病性等有密切关系，并可使Ｉ型ＨＩＶ逃 避细胞毒性Ｔ细胞及中和性抗体的免疫攻击【 】， 同理可推测，ＡＬｖ．Ｊ的ｇｐ８５蛋白的变异可能会对病 毒的抗原性、细胞嗜性等特性产生影响。ＡＬＶ－Ｊ的 ｇｐ８５蛋白比其他亚型更易发生变异，其高变区定位 于ｈｒｌ，ｈｒ２和ｖｒ３区域，尤其ｈｒｌ和ｈｒ２更是变异集 中的区域 －２５１，本实验中得到了类似的结论。两株 分离自血管瘤及髓细胞瘤并发的商品蛋鸡病例的 ＡＬＶ．Ｊ，其ｇｐ８５蛋白变异较大，这些变异可能会影 响到病毒的致瘤性、毒力甚至是组织亲嗜性，从而 对其肿瘤类型产生影响，而ｇｐ８５蛋白的变异对于病 毒毒力的实际影响尚需后续实验证实。 ＡＬＶ—Ｊ的发生发展除了与病毒本身的特性有关 之外，还与宿主的遗传背景、免疫应答水平、环境 因素等有关，因此，多种肿瘤类型在同一病例中出 现，除了可能与病毒致瘤关键基因中的变异相关之 外，还可能与宿主遗传背景相关联，是否在蛋鸡引 种、繁育过程中出现问题从而引起ＡＬＶ Ｊ感染，还 有待进一步阐明。 参考文献： ［１】Ｐａｙｎｅ Ｌ Ｎ，Ｂｒｏｗｎ Ｓ Ｒ，Ｂｕｍｓｔｅａｄ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｏｎｌｅｓｓ，ａ ｎｏｖｅｌ ｓｕｂｇｒｏｕｐ ｏｆ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ】．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，１９９１，７２：８０１—８０７． ［２】 Ｂａｉ Ｊ，Ｐａｙｎｅ Ｌ Ｎ，Ｓｋｉｎｎｅｒ Ｍ Ａ．ＨＰＲＳ－１０３（ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ，ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ）ｈａｓ ａｎ ｅｎｖ ｇｅｎｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ＥＡＶ－０ ａｎｄ Ｅ５１ ａｎｄ ａｎ Ｅ ｅｌｅｍｅｎｔ ｆｏｕｎｄ ｐｒｅｖｉｏｕｌｙ ｏｎｌｙ ｉｎ ｓａｒｃｏｍａ ｖｉｕｒｓｅｓ［Ｊ】．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，１９９５，６９： ７７９—７８４． ［３］ Ｓｍｉｔｈ Ｌ Ｍ，Ｔｏｙｅ Ｋ，Ｈｏｗｅｓ Ｎ．Ｎｏｖｅｌ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｓｅ— ｑｕｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈｉｃｋｅｎ ｇｅｎｏｍｅ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ＨＰＲＳ一１０３ （ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ）ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｕｒｓ【Ｊ】．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，１９９９，８０： ２６】一２６８． ［４］ Ｓｔｅｄｍａｎ Ｎ Ｌ，Ｂｒｏｗｎ Ｔ Ｐ．Ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｂｒｏｉｌｅｒｓ ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｕｒｓ ｓｕｂｇｒｏｕｐ【Ｊ】．Ａｖｉｎａ Ｄｉｓ，１９９９，４３：６０４—６１０． ［５］ 成子强，张利，刘思当，等．中国麻鸡中发现禽Ｊ亚群白 血病［Ｊ］微生物学报，２００５，４５（４）：５８４—５８７． ［６］ Ｓｕｎ Ｓ，Ｃｕｉ Ｚ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｓｕｂ— ｒｇｏｕｐ Ｊ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｌｏｃａｌ”ｙｅｌｌｏｗ” ｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ】．Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ，２００７，３６（３）：２２１－６． ［７】Ｘｕ Ｂ Ｒ，Ｄｏｎｇ Ｗ Ｘ，Ｙｕ Ｃ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ａｖｉｎａ ｌｅｕｋｏ— ｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ ｉｎ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｌａｙｅｒ ｆｌｏｃｋｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ】． Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ，２００４，３３（１）：１３—１７． 第５期 吴晓平，等．商品蛋鸡Ｊ亚群禽白血病病毒分离鉴定及序列分析 ３５５ ［８］ 成子强，刘思当，孟祥凯，等．商品蛋鸡成髓细胞瘤、血 管瘤型Ｊ亚群自血病病理学初报［Ｊ］．畜牧兽医学报， ２００８，３９（７）：９３５—９４０． ［９］ 成子强，张玲娟，刘杰，等．蛋鸡中发现Ｊ亚群白血病与网 状内皮增生症自然混合感染［Ｊ］．中国兽医学报，２００６，２６ ｆ６１：５８６－５９０． ［１０］ Ｑｉｎ Ａ，Ｌｅｅ Ｌ Ｆ，Ｆａｄｌｙ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ ［Ｊ］．Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ，２００１，４５：９３８—９４５． 秦爱建，刘岳龙，周绮雯，等．Ｊ亚群禽白血病病毒的免 疫荧光检测效果『Ｊ】．中国预防兽医学报，２００１，３：２１４．２１６． ［１２］ Ｂｅｒｇ Ｄ Ｔ，Ｇｕｐｔａ Ａ，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ Ｍ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ—ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ－－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎ－－ ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＴＣＦ１ １［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍ，２００７，２８２： ３６８３７．３６８４４ ［１３］ Ｗｅｉ Ｄ，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ Ｅ Ｌ，Ｚｈｕ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｒｅｃｔ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｂｙ ｈｏｓｔ－－ｉｎ－－ ｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００３，６３： ３８５５ ３８５９． ［１４］ 秦爱建，崔治中，Ｌｅｅ Ｌ Ｆ，等．禽白血病病毒Ｊ亚群ｅｎｖ基 因的克隆和序列分析［Ｊ】＿中国病毒学，２００１，１６（１）：６８—７３． ［１５］ 张丹俊，赵瑞宏，程宝艳，等．商品代罗曼蛋鸡发生禽Ｊ亚 群白血病［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（６）：２５０１—２５０２． ［１６］ 冯小宇，徐镔蕊，Ｌｅｅ Ｌ Ｆ，等．蛋鸡Ｊ亚群禽白血病病毒 的分离与初步鉴定［Ｊ］．中国兽医杂志，２００８，４４（１）：４３—４４． ［１７］齐新永，刘佩红，孙泉云， 等．上海地区商品代蛋鸡Ｊ亚群 禽白血病的病理学观察［Ｊ］ 中国兽医科学，２００７，３７（０９）： ７９８．８０１． ［１８］Ｂｒｏｗｎ Ｄ Ｗ，Ｂｌａｉｓ Ｂ Ｐ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｈ Ｌ．Ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ （ＬＴＲ）ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｅｎｖ，ａｎｄ ａ ｒｅｇｉｏｎ ｎｅａｒ ｔｈｅ ５’ＬＴＲ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｒｏｕｓ．－ａｓｓｏｃｉａｔ－－ ｅｄ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅｓ ０ ａｎｄ １［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，１９８８，６２：３４３１—３４３７． ［１９］Ｂｒｏｗｎ Ｄ Ｗ，Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｈ Ｌ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｅｎｖ ａｎｄ ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｔｒｏｐｉｓｍ ｏｆ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓｅｓ ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，１９８８，６２：４８２８—４８３１． ［２０］Ｃｈｅｓｔｅｒｓ Ｐ Ｍ，Ｈｏｗｅｓ Ｋ，Ｐｅｔｈｅｒｂｒｉｄｇｅ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｖｉｒａｌ ｅｎｖｅ— ｌｏｐｅ ｉｓ ａ ｍａｊｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ａｎｄ ｍｙｅｌｏｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ ｂｙ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｖｉｕｒｓ ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ Ａ ａｎｄ Ｊ，ｒｅ— ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ［Ｊ］．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，２００２，８３：２５５３—２５６１． ［２１］Ｈｗａｎｇ Ｓ Ｓ，Ｂｏｙｌｅ Ｔ Ｊ，Ｌｙｅｒｌｙ Ｈ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｖｅｌｏｐｅ Ｖ３ ｌｏｏｐ ａｓ ｔｈｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｏｆ ｃｅｌｌ ｔｒｏｐｉｓｍ ｉｎ ＨＩＶ１［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５３（５０１５）：７１—７４． ［２２】Ｓｈｉｏｄａ Ｔ，Ｌｅｖｙ Ｊ Ａ，Ｃｈｅｎ—Ｍａｙｅｒ Ｃ．Ｓｍａｌｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｖ３ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｇｐｌ２０ ｃａｎ ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｔｒｏｐｉｓｍ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｅｓ ｔｙｐｅ Ｉ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ Ａｃａｄ ｏｆ Ｓｃｉ，１９９２，８９（２０）：９４３４—９４３８． ［２３］Ｓｉｌｖａ Ｒ Ｆ，Ｆａｄｌｙ Ａ Ｍ，Ｈｕｎｔ Ｈ Ｄ．Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｖｅ— ｌｏｐｅ ｇｅｎｅ ｏｆ ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ ａｖｉａｎ ｌｅｕｃｏｓｉｓ ｖｉｕｒｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆ－ ｆｅｒｅｎｔ ｆａｒｍｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌ，２０００，２７２（１）： １０６一ｌ１１． ［２４］Ｖｅｎｕｇｏｐａｌ Ｋ，Ｓｍｉｔｈ Ｌ Ｍ，Ｈｏｗｅｓ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｖａｒｉｎａｔｓ ｏｆ Ｊ ｓｕｂｇｒｏｕｐ ａｖｉａｎ ｌｅｕｃｏｓｉｓ ｖｉｕｒｓ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｓ ｍｕｌｔｉ— ｐｉｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｅｎｖ ｇｅｎｅ［Ｊ］Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，１９９８，７９：７５７—７６６． ［２５１ Ｃｕｉ Ｚ Ｚ，Ｄｕ Ｙ，Ｚｈａｎｇ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｆｉｅｌｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ａｖｉａｎ ｌｅｕｋｏｓｉｓ ｓｕｂｇｒｏｕｐ Ｊ ｖｉｒｕｓｅｓ ｗｉｔｈ ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ ＨＰＲＳ—１０３ ａｎｄ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｓｔｒａｉｎｓ［Ｊ］．Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ，２００３，４７ （４）：１３２１—１３３０． （本文编辑：陈立群）
