ｃａｒｄｉｏｇｅｎｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙｅｄｅｍａｆｏｌｌｏｗｉｎｇｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｂｙｐａｓｓ［Ｊ］．ＥｕｒＪＣａｒｄｉｏｔｈｏｍｃＳｕｒｇ，１９９６，１０（６）：４６３．４６６．（收稿日期：２０１３－０４一１０）［９］黄洪，叶宁．心内直视手术后鱼精蛋白不良反应与不同给药（本文编辑：李霞）途径的观察［Ｊ］．广西医学，２００８，３０（４）：５２４－５２６．肝细胞癌微环境中缺氧诱导因子表达抑制与Ｐ５３相互作用张巍张昆斗章张铁军【摘要】目的分析肝癌病理微环境中缺氧诱导因子（ＨＩＦ）、Ｐ５３水平与肝癌浸润发展可能存在的关联性。方法采用流式细胞仪法测定不同病理分期肝癌细胞Ｐ５３标志、同时免疫组化法观察ＨＩＦ的表达特点，比较既往罹患肝病指标：肝功能［丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、白蛋白、甲胎蛋白］与ＨＩＦ、Ｐ５３相互关系。结果包膜完整与不完整、肿瘤直径≤５ｃｍ与＞５ｅｍ、肿瘤分期Ｉ＋Ⅱ期与Ⅲ期ＨＩＦ阳性表达率分别为５０．０％（１４／２８）与３３．３％（１４／４２）、４３．６％（１７／３９）与２２．６％（７／３１）、２９．７％（１１／３７）与１８．２％（６／３３），包膜破坏、肿瘤直径增大（＞５ｅｒａ），ｍ期患者阻性表达率明显下降，组间差异均有统计学意义（Ｐ值分别为０．０４０、０．０３０、０．０３０），Ｐ５３阳性表达率分别为４２．９％（１２／２８）与８３．３％（３５／４２）、５１．３％（２０／３９）与９３．５％（２９／３１）、３５．１％（１３／３７）与６９．７％（２３／３３），包膜破坏、肿瘤直径增大（＞５ｃｍ）、Ⅲ期患者阳性表达率相对增高，组间比较差异有统计学意义（Ｐ值分别为０．０３０、０．０３０、０．０４０）。以往患有慢性肝炎、慢性肝硬化患者及ＡＦＰ＞３５ｎｇ／Ｌ、ＡＬＴ＞８０Ｕ／Ｌ患者ＨＩＦ阳性表达率分别为３６．２％（２１／５８）、２７．９％（１７／６１）、２７．１％（１４／５１）、２８．２％（１１／３９），均低于非慢性肝炎５８．３％（７／１２）、非肝硬化５５．０％（５／９）、ＡＦＰ＜３５ｎｇ／Ｌ５８．０％（１１／１９）、ＡＬＴ＜８０Ｕ／Ｌ５１．６％（１６／３１）患者，差异均有统计学意义（Ｐ值分别为０．０４６、０．０４７、０．０３７、０．０４５），以往患有慢性肝硬化、ＡＦＰ＞３５ｎｇ／Ｌ、Ａ１月＞８０Ｕ／Ｌ、白蛋白＜３５ｇ／Ｌ患者Ｐ５３阳性表达率分别为８２．ｏ％（５０／６１）、７４．５％（３８／５１）、６９．２％（２７／３９）、７３．７％（４２／５７），分别高于以往无慢性肝硬化４４．４％（４／９）、ＡＦＰ＜３５ｎｇ／Ｌ３１．６％（６／１９）、ＡＬＴ＜８０Ｕ／Ｌ２２．６％（７／３１）、白蛋白＞３５ｓ／Ｌ４６．２％（６／１３）患者，差异均有统计学意义（Ｐ值分别为０．０３７、０．０４０、０．０３２、０．０４１）。结论ＨＩＦ与Ｐ５３是监测肝癌浸润发展的重要因子。【关键词】肝癌；缺氧诱导因子；Ｐ５３ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎａｎｄＰ５３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｅｐａｔｉｃｃｅｌｌｕｌａｒｃａｎｃｅｒＺＨＡＮＧＷｅｉ。ｚＨＡＮＧＫｕｎ，ＤＯＵＺｈａｎｇ，ｚＨＡＮＧＴｉｅ－ｊｕｎ．ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＪｉａｍｕｓｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。＾ａｍｕｓｉｌ５０００．Ｃｈｉｎａ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｈｆａｃｔｏｒｓ（ＨＩＦ），Ｐ：５３ｌｅｖｅｌａｎｄｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｏｆｔｈｅｌｉｖｅｒＣａｎｃｅｒｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ．ＭｅｔｈｏｄｓＦｌｏｗｃ：ｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅＰ５３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｃｇｌｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＩＦｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．ｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＬｉｖｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎ（ａｌａｎｉｎｅａｍｉｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ）．ａｌｂｕｍｉｎ（ＡＬＢ）．ａｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ））ａｎｄＨＩＦ．Ｐ５３．ＲｅｓｕｌｔｓＨＩＰｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ．ｔｕｍｏｒｄｉａｍｅｔｅｒ≤５ｃｍａｎｄ＞５ｃｍ，ｔｕｍｏｒｓｔａｇｅＩ＋ＩＩａｎｄⅢｗｅｒｅ５０．０％（１４／２８）ａｎｄ３３．３％（１４／４２），４３．６％（１７／３９）ａｎｄ２２．６％（７／３１），２９．７％（１１／３７）ａｎｄ１８．２％（６／３３）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅＨＩＦｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｌＩｃａｐｓｕｌａｒｄａｍａｇｅ，ｔｕｍｏｒｄｉａｍｅｔｅｒｉｎｃｒｅａｓｅｓ（＞５ｃｍ），ＩＩＩｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＝０．０４０，０．０３０，０．０３０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｐ：５３ｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒａｔｅｗｅｒｅ４２．９％（１２／２８）ｖｓ．８３．３％（３５／４２），５１．３％（２０／３９）ｖｓ．９３．５％（２９／３１），３５．１％（１３／３７）ｖｓ．６９．７％（２３／３３）．而ｅＰ５３ｐｏｓｉｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃａｐｓｕｌａｒｄａｍａｇｅ．ｔｕｍｏｒｄｉａｍｅｔｅｒｉｎｃｒｅａｓｅｓ（＞５ｃｍ），ｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｗｅｒｅｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｈｉｇｈｅｒ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｆｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐｓｗａｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＝ｏ．０３０，０．０３０，０．０４０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）。ＨＩＰｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｗｉｔｈｐａｓｔｓｕｆｆｅｒｉｎｇｆｒｏｍｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ｃｉｒｒｈｏｓｉｓａｎｄｃｈｒｏｎｉｃＡＦＰ＞３５ｎｇ／Ｌ，ＡＬＴ＞８０Ｕ／Ｌｗｅｒｅ３６．２％（２１／５８），２７．９％（１７／６１），２７．１％（１４／５１），２８．２％（１１／３９），ｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆ５８．３％（７／１２）ｉｎｎｏｎ．ｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓ。ｎｏｎ．ｃｉｒｒｈｏｔｉｃ５５．０％ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－６３１５．２０１３．１３．００４基金项目：黑龙江卫生厅科研课题（２０１１－４２１）作者单位：１５００００佳木斯大学临床医学院（张巍、张昆、斗章）；佳木斯大学附属第二医院（张铁军）万方数据虫旦筮金监废垫！ｊ生！旦筮呈竺鲞筮！！翅垡堕堕型丛生！ｉ些丛ｇ垒ｉ塑：地！垫！！：！些垫：№：！！（５／９），ＡＦＰ＜３５ｎｇ／Ｌ５８．０％（１１／１９）。ＡＬＴ＜８０Ｕ／Ｌ５１．６％（１６／３１）ｏｆｐａｔｉｅｎｔｓ，ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＝０．０４６，０．０４７，０．０３７，０．０４５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｐ５３ｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｉｎｐａｔｉｅｎｔｗｉｔｈｐａｓｔｓｕｆｆｅｒｉｎｇｆｒｏｍｃｈｒｏｎｉｃｃｉｒｒｈｏｓｉｓ，ＡＦＰ＞３５ｒｉｇ／Ｌ，ＡＬＴ＞８０Ｕ／Ｌ，ａｌｂｕｍｉｎ＜３５ｇ／Ｌｗｅｒｅ８２．０％（５０／６１），７４．５％（３８／５１），６９．２％（２７／３９），７３．７％（４２／５７），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｈｉｓｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｐａｔｉｅｎｔｗｉｔｈｏｕｔｃｈｒｏｎｉｃ３１．６％（６／１９），ＡＬＴ＜８０Ｕ／Ｌ２２．６％（７／３１），ａｌｂｕｍｉｎ＞３５∥Ｌ４６．２％（６／１３）．ＴｔＩｌｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＝０．０３７，０．０４０，０．０３２，０．０４ｌ，ＨＩＦａｎｄＰ５３ｍｉｇｈｔｂｅｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｆａｃｔｏｒｉｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ出ｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ、．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｃｉｒｒｈｏｓｉｓｗｉｔｈＡＦＰ＜３５ｎｇ／ＬｈｅｐａｔｏｃｅＨｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｖａｓｉｏｎ．４４．４％（４／９）。ｏｒｆＫｅｙｗｏｒｄｓ】Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ；１＇５３乏氧会抑制正常细胞的增殖，严重乏氧甚至会导致细胞的死亡。肿瘤的能量代谢以无氧酵解为主，使得肿瘤细胞可以适应乏氧的环境，抵制乏氧诱发的细胞凋亡…。乏氧的微环境是造成肝癌不良预后的因素之一。聚焦与糖酵解相关的细胞活性因子，是早期诊断和肿瘤浸润侵袭转化的关键。近年来，缺氧诱导因子（ＨＩＦ）在多种类型肿瘤形成的作用引起关注旧Ｊ，本实验拟证实ＨＩＦ在肝癌微环境中的表达特征，及其与Ｐ５３的关联性。资料与方法一、一般资料病例来源于２００８—２０１０年佳木斯大学临床医学院收治的患者７０例，符合临床诊断特征，病理学检查证实的肝细胞肝癌患者，外科手术切除肝癌组织标本。患者均知情同意。二、方法１．试剂：单克隆抗体（１ｔ３０ｔｘｇ，Ａ－２２１８—１００，Ｅｐｉｇｅｎｔｅｋ），二甲苯（ＡＲ．洛阳市化学试剂厂），过氧化氢（ＡＲ．天津市福晨化学试剂厂）、无水乙醇（广东廉江试剂有限公司）。２．肝细胞Ｐ５３染色流式细胞仪法分析：取肝组织研磨后过２００目过筛，冷ＰＢＳ洗涤细胞２次，离心，收集培养细胞（包括上清）。加入１×ｂｉｎｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ２００Ｉｘｌ，重悬细胞，使细胞浓度调整至２×１０６／ｍｌ，每管加入Ｐ５３抗体２０灿ｌ取细胞悬液加入５ｍｌ流式管中，轻轻震荡混匀后，室温避光孵育１５ｍｉｎ。上机分析ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ，设定合适的获取条件，用Ｃｅｌｌｑｕｅｓｔ软件读取细胞１００００个，保存获取数据，获取Ｐ５３表达阳性率，并用Ｍｏｄｉｆｉｔ软件分析。３．免疫组化检测ＨＩＦ－２ａ：组织标本按照常规免疫组化染色方法标记后，显微镜下观察。４。结果判断：染色结果观察：由两名不知患者临床情况的病理科医生观察ＨＥ染色及免疫组化染色之组织芯片，采用双盲法分别对同一芯片判读。按照胞质染色强度和面积进行评分：一：没有染色或万方数据背景染色；＋：弱阳性染色或中等染色强度面积５０％；＋＋：中等染色强度面积大于５０％：＋＋＋：强阳性染色面积大于５０％。我们将＋定为低表达，＋＋、＋＋＋定为高表达。计算ＨＩＦ－２ａ阳性表达率：阳性例数／总例数×１．００％。５。统计学处理：采用ＳＰｓＳ１３。０统计软件处理数据，计数资料采用Ｘ２检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果１．免疫组化结果：镜下观察，可见肝癌组织肝小叶结构紊乱，染色比较均匀，ＨＩＦ－２ａ染色阳性主要在肝癌细胞，偶尔出现在浸润的淋巴细胞中，成纤维细胞和内皮细胞很少有阳性表达。ＨＩＦ－２ａ集中表达在细胞质，呈现棕色颗粒状。见图１、２。２．不同病理特征肝癌组织表达关系：见表１。３．慢性肝病史的影响：见表２。讨论肿瘤的能量代谢是一个以无氧酵解为基础的过程，无论在肿瘤乏氧放疗生物学，分子生物学及临床研究方面都成为最活跃的研究领域。大量的实验室与临床资料表明肿瘤乏氧与放射治疗抵抗，药物抵抗，恶性侵袭、转移的生物学行为及不良预后有关。乏氧主要通过使细胞周期停滞，修复酶增加，耐药蛋白表达增加，突变细胞克隆的选择，伴随肿瘤微环境的变化如酸性环境等改变。本研究肿瘤体积增大（＞５ｃｍ），突破包膜，呈现恶性生物行为病例，Ｉ－ＩＩＦ下降。这可能意味着，ＨＩＦ是抑制肝癌细胞浸润的主要基因。既往有肝炎病史，血清ＡＦＰ高水平病例ＨＩＦ呈现明显下降，说明在肝炎的慢性进展中，各种因素相互作用突破了ＨＩＦ的机制，导致癌基因表达。目前已知ＨＩＦ与多种肿瘤有关口Ｊ，ＨＩＦ下游基因涉及到葡萄糖的代谢、凋亡、ｐＨ值调节、血管生成等过程Ｈｏ，在促进肿瘤细胞快速适应缺氧微环境发挥着重要的作用。生围筮金堕压垫！！至！旦笠！！鲞塑！！塑垦墅ｉ！型塑型型竺垡￡！ｉ塑：巫望！！盟！：坠至２：丛垒！呈・１３－增高，说明ＨＩＦ一２ａ水平下调可以提高Ｐ５３的去磷酸化和Ｐ５３的总量，并选择性激活Ｐ５３下游靶基因，导表２既往慢性肝病对肝癌微环境ＨＩＦ、Ｐ５３的影响［例（％）］图１免疫组化染色肝癌组织ＨＩＦ－２ａ高表达结果（２００×）注：ＨＩＦ：缺氧诱导因子，ＡＦＰ：甲胎蛋白，ＡＬＴ：丙氨酸氨基转移酶，ＡＬＢ：白蛋白致细胞周期阻滞，死亡细胞比例下降。因此ＨＩＦ是肝癌细胞浸润生长中重要的因子，对慢性肝炎史患者有动态监测的必要性。图２肝癌组织常规染色阴性结果（２００×ＨＥ）参考文献表ｌ不同病理特征肝癌组织ＨＩＦ与Ｐ５３表达水平关系［例（％）］心１Ｊｎ１ＪＭａｊｍｕｎｄａｒＡＪ，ＷｏｎｇＷＪ，Ｓｉｍｏｎａｎｄｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｅ２９４＿３０９．ＧｅｒａｌｄＤ，ＢｅｔａＥ，ＦｒａｐａｒｔＹＭ，ｅｔｔｏｈｙｐｏｘｉｅ蜘［Ｊ］．ＭｏｌＣｅｌｌ，２０１０，４０（２）：ａ１．ＪｕｎＤｒｅｄｕｃｅｓＭＣ．Ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒｓｔｕｍｏｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｂｙｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｃｅｌｌｓｆｒｏｍｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００４，１１８（６）：７８１－７９４．口１ＪＰｅｌｌｅｔｉｅｒＪ，ＢｅＨｏｔＧ，ＧｅｕｎｏｎＰ，ｅｔａｔＧｌｙｃｏｇｅｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｓｉｎｄｕｃｅｄｉｎｈｙｐｏｘｉａｂｙｔｈｅｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＨｎｓｐｎＧ，ＯｇｕｎｓｈｏｌａＯｎｃｏｌ，２０１２，２：１８．Ｏ，ＧｅｓｓｍａｎｎＭ．ＨＩＦｓａｎｄ［ｕｎｌｏｌＢ－－ｃａｕｓ＠ｓａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ［Ｊ］．ＡｍＪ２８６（４）：Ｒ６０８－６２３．瞪ＨｉｇａｓｈｉｍｕｒａＹ，ＴｅｒａｉｒｅｇＩＩｌ砒ｅ８ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｇｕｌＩｎｔｅｇｒＣｏｍｐＰｈｙｓｉｏｌ，２００４，Ｔ，ＹａｍａｊｉｏｆＲ，ｃｔａｔＫｅｌｃｈ—ｌｉｋｅ２０ｕｐ－ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｙｏｎｈｙｐｏｘｌａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ－２ｃｔｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｔｈｒｏｕｓｈｐｒｏｔｅｉｎ・・Ｒｅｓ注：Ｈ１Ｆ：缺氧诱导因子ｈｙｐｏｘｉａ－－ａｎｄＨｉｐｐｅｌ—－Ｌｉｎｄａｎｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＣｏｍｍｕｎ，２０１１，４１３（２）：２０１－２０５．在正常情况下ＨＩＦ可以与Ｐ５３形成复合物，促进Ｐ５３的稳定性，增强Ｐ５３的磷酸化，促进细胞的凋亡【５引。缺氧会激活ｍＴＯＲ和ＵＲＰ信号通路，会导致细胞中自由基的不正常积累，对ＤＮＡ和蛋白造成损伤，基因突变，细胞周期暂时停滞，导致肿瘤的发生¨１。本研究中，ＨＩＦ下调表达病例Ｐ５３呈现明显№１ＪＧｒｅｔｅｎＴＦ。ＺｈａｏＦ，ＧａｍｒｅｋｅｌａｓｈｖｉｌｉＪ，ｅｔａ１．ＨｕｍａｎＴｈｌ７ｃｅｉｌｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃａｎｃｅｒ：Ｆｒｉｅｎｄｓｏｒｆｏｅ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１２，１（８）：１４３８—１４３９．口１ＪＶａｎＰａｔｏｔＭＣ，ＧａｓｓｍａｎｎＭ．Ｈｙｐｏｘｉａ：ａｄａｐｔｉｎｇｔｏｈｉｇｈａｌｔｉｔｕｄｅｂｙｍｕｔａｔｉｎｇＥＰＡＳ・ｉ，ｔｈｅｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇＨＩＦ－２ｃｔ［Ｊ］．Ｈｉ曲ＡｌｔＭｅｄＢｉｏｌ，２０１ｌ，１２（２）：１５７—１６７．（收稿日期：２０１３－０４－２０）（本文编辑：苗丽娟）万方数据
