植物组织中可溶性糖与淀粉的测定

一、蒽酮法测定可溶性糖

【仪器与用具】

分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。

【试剂】

1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。

2．浓硫酸（比重1.84）。 【方法】

1．标准曲线的制作

取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。

表1 各试管加溶液和水的量

管 号 100μg/ml蔗糖液(ml) 水(ml) 蔗糖量(μg) 0 0 2.0 0 1～2 0.2 1.8 20 3～4 0.4 1.6 40 5～6 0.6 1.4 60 7～8 0.8 1.2 80 9～10 1.0 1.0 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

2．可溶性糖的提取

取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

3．显色测定 吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。 4．计算可溶性糖的含量

VCna3可溶性糖含量(mg/g)=W10

式中 C－标准方程求得糖量(μg)； a－吸取样品液体积(ml)； V－提取液量(ml)； n －稀释倍数；

W－组织重量（g）。

四、淀粉含量的测定

【仪器与用具】

电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml×1，2.0ml×3，5ml×4；分光光度计；记号笔。

【试剂】

（1）浓硫酸（比重1.84）；

（2）9.2mol/L HClO4；

（3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）；

（4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。

【方法】 1．标准曲线制作

取小试管11支从0～10编号，按表2加入溶液和蒸馏水。 以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，绘制相应的标准曲线。

表2 各试管加入标准液和蒸馏水量

管 号 淀粉标准液(ml) 蒸 馏 水（ml） 淀粉含量（mg） 0 0 2.0 0 1～2 0.4 1.6 40 3～4 0.8 1.2 80 5～6 1.2 0.8 120 7～8 1.6 0.4 160 9～10 2.0 0 200 2．样品提取

将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。

3．测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。

按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。

VCa1006淀粉含量（%）=W10

式中 C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）；

V－提取液总量（ml）； a－显色时取液量（ml）； W－样品重（g）。

注：淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷盘上，加2滴I2-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。