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微胶囊技术在益生菌中的应用

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工艺技砸一■nmSCIENCEANDTECHNOLOG’食品科技微胶囊技术在昼兰面咋的应用冯琼,李保国,黄志强,高盈娴(上海理工大学食品与生物技术研究所,上海200093)摘要:益生菌对温度、氧、酸、碱极为敏感,在加工、运输、储存过程中稳定性差易失活,使功能丧失。用微胶囊包埋能保护益生菌免受外界环境侵害,提高其稳定性和利用率。本文介绍了益生茵及其微胶囊化的珏要性,并阐述了双歧杆菌、乳酸菌及其他一些菌种的微胶囊化研究进展。关键词:益生茵;微胶囊化;双歧杆菌;乳酸茵TheapplicationofmicroencapsulationtechnologyinprobioticsFENGQiong,LIBao-guo,HUANGZhi-qiang,GAOYing-xian(UniversityofShanghaiforScienceandTechnology,InstituteofFoodandBiotechnology,Shanghai200093)Abstract:Probioticsisextremelysensitivetotemperature,oxygen,acidandalkali.Duringtheprocessing,transportationandstorage,thestabilityofprobioticsagainstacidaffectisvulnerabletobeworse,andfunctionalfromtheactivitiviesofprobioticswereIosed.Microencapsulationembeddingcaneventheprotectagainstprobioticsextemalenvironment,improvingitsstabilityandefficiency.Inthispaper,theprobioticsandthemicroencapsulatedwereintroduced,andpresentedthelatestresearchadvanceofnecessaryofprobioticsbifidobacteria,lactobacillusandotherbacteriamicroencapsulation.Keywords:probiotics;microencapsulation,bifudobacteda;lactobacillus益生菌(probiotics),又称为益生素、微生态制剂,是具有维持人体内菌群平衡、并对人体健康产生有益作用的活菌制品或含有菌体组分及其代谢产物的死菌制品。根据国家食品药品监督管理局2005年7月1日发布的《益生菌类保健食品申报与审评规定(试行)》(国食药监注[2005】202号),我国目前可用于保健食品的益生菌如表1所示:表1我国目前可用于保健食品的益生菌收稿日期:2007-06-30l,旧SCIENCE食品科技ANDTECHNOLOGy■工艺技水确保其能抵抗胃酸顺利到达肠道并定殖,科学家们采用了各种措施。其中将益生菌进行微胶囊包埋被认为是最为有效、最有前景的一种方法。微胶囊包埋技术是采用一种成膜材料。将包埋与冷冻干燥有机结合起来,在冷冻干燥的同时迅速在益生菌活菌体周围形成一层类似微囊的保护膜,即将益生菌活菌体包埋在保护膜内,从而达到减少甚至避免菌体冻干损伤.保护益生菌免受噬菌体的侵害,提高活菌存活率,延长活菌常温保存期的目的。将益生菌微胶囊化的意义:(1)可将益生菌与氧气等外界不利环境分开:(2)掩盖其特有的令人不愉快的气味;(3)制品颗粒微小,可添加到一些食品中;(4)采用肠溶性壁材,防止胃酸的破坏。使尽可能多的菌体到达肠道.真正起到有益于健康的作用。2益生菌的微胶囊化方法2.1双歧杆菌和乳酸菌的微胶囊化用于保健食品的益生菌中主要包括双歧杆菌和乳杆菌,从20世纪80年代开始就有人进行益生菌微胶囊化的探索并申请了多项专利。目前,国内外已经发展了多种微胶囊化技术应用于益生菌,见表2,主要包括。表2益生茵微囊化方法、原理及优缺点益生菌的生理保健功能主要包括:防治各种胃病和肠道疾病、增强免疫功能、防治癌症、降低胆固醇、防治高血压、抗过敏反应、保持泌尿生殖系统的健康、排斥致病菌、维持肠道菌群平衡以及营养功能等。不过,要获得所期望的保健效果,益生菌必须达到足够的数量.国家规定益生菌产品出厂时,活菌含量必须高于lxlO%fu/mDll。然而.乳杆菌和双歧杆菌等益生菌多为厌氧菌或兼性厌氧菌。在生长过程中。不形成芽孢,抗性较差,大多耐酸性较差、对氧极为敏感,活性保持较困难回。导致进入市场的产品中活菌数量会急剧下降.产品的贮存稳定性极差,保健功效损失快。例如,发酵乳制品在18%的条件下贮存8。12周以后.活菌数下降了5-6个对数周期13]:另外.益生菌要对人体产生有益作用。首先它必需通过胃环境以大量的存活菌到达肠道并定殖于肠粘膜上。但在胃酸和胆盐的环境中.乳制品中嗜酸乳杆菌和双歧杆菌菌数会很快下降『4】。使得最终在人体内没有足够的益生菌发挥作用。据报导四,口服冻干菌粉,在胃中的存活率仅为l%,存活率极低。1益生菌微胶囊化的意义为了避免外在环境对益生菌活性的影响,并微胶囊技术喷雾干燥喷雾冷凝流化床包衣,空气悬浮法挤压法壁材类型水溶性聚合物蜡状物、脂肪酸、水溶性或脂溶性单体和聚合物水溶性或脂溶性聚合物、油脂、蜡状物水溶性或脂溶性聚合物主要原理优缺点微胶囊务1L・心壁羽)甩芎'缏,蘑承.浴刑,星嗣I耋J1L竹迎Jq丁J.业1L王厂。"lY-霄1£船杈‘J王茵的活力降低薹茎岔耋j茔堂态的壁材中,喷雾,壁材冻细菌的活性提高,但能耗增大结凝固得微胶囊………P¨~一,胃一‘…”一’一9………硬化.包覆芯材成微胶囊凝聚法,相分离法水溶性聚合物戮鬻嬲搿激纂黼.dte.差-1":辚-2/,/,嚣1,4-蛐因芯材固体粉末悬浮于空气中。壁材溶液喷雾利于进行工业化生产。但颗粒相对流化。悬浮滚动,包覆芯材,干燥得微胶囊较大,易粘连,热敏性茵的活力较低萋麓善霎麟擞囊篓辙嚣娥…,不用与芯材混合,壁材通过加热、交联或反溶=,三::赫x、“4。…””’11“……一7荆作用僵化形成微胶囊减小.凝聚析出微胶囊质乳化,向脱水溶剂中挤压,包覆材料脱水一=型。’。娄羔’公…沙…’’”静电学方法含相反电荷的聚合体或混合物兰摹莲薹麦笋亭墨戮主荔耋嚣差羹蓑囊茎笋大小较均匀,但不利于为壁材,混合时电荷相互中和,壁材溶解度:嚣霪==…”“…一…1。。~…‘一’点高于体温的油脂喷涂于颗料表面。制得的产品室温保存6个月后存活率在50%以上。但由于只是海藻酸钙的单层包埋,因此抗胃酸以及肠溶性有限。随后他们将双歧杆菌菌粉与淀粉混合后悬浮于熔点在30—45。C的硬化油中作为芯材.将一定比例的明胶与果胶作为壁材,用双通道喷嘴(外管壁材溶液、内管芯材溶液),滴入冷却油得软胶囊后,再浸渍于5%的Ca盐中,进行肠溶性处理,取出后冷风干燥.产品室温下6个月后存活率也大于50%,并能通过肠溶性崩解。在该方法中,硬化油实际上也起到了作为2.1.1挤压法挤压法最初由Sehultz于1956年提出.是双歧杆菌微胶囊化使用最广泛的一种方法悯。该方法的原理是将双歧杆菌与亲水性胶体混合。通过针式喷嘴挤出菌种悬液,逐滴滴入同化液中,形成微胶囊。国外利用挤压法微胶囊化益生菌,最早是海藻酸钙的单层包埋,后来逐渐发展成为多层包埋。80年代中期,日本有关微囊化的专利较多。例如.丸山哲彦等17】将双歧杆菌菌液及淀粉等与海藻酸钠混合.通过喷嘴喷人CaCl:固化液中,干燥后再用融工艺技市一壁材的作用,制得的产品耐酸性有很大提高,但由于油脂温度过高,导致细菌死亡率高。藤原正弘等18J采用双重乳状液法,将含双歧杆菌的活菌液与添加了疏水性乳化剂的油脂混合形成包含活菌的WA3型乳状液.再将制得的乳状液分散于多价金属盐溶液中.形成WA3,W型双重乳状液,然后通过喷嘴逐滴加入成膜剂中.反应得直径在l。5ram的球状胶囊。产品在pH4.0以下的溶液中保存21d,仍有1%以上双歧杆菌存活。1994年Chuo—ku等191对双通道进行改进采用了三层挤乐法.双歧杆菌菌粉悬浮于窒温疏水物质(如氢化油脂)中作为芯材,擘材为:(1)熔点高于体温的油脂;(2)一定比例的明胶和果胶。芯材和壁材分别进入一个三层同心喷嘴的内、中、外层,然后同时滴人冷却油中形成直径为2.5mm的内层为固态油脂.外层为明胶和果胶膜的双层双歧杆菌胶囊。该产品具有很好的肠溶性,但由于双歧杆菌的耐热温度低。制备过程中与熔点高于体温的油脂接触时死亡率高。而且,双歧杆菌在油脂中分散极不均匀,因此导致产品质量不稳定。我国有关益生菌微胶囊化的研究起步较晚,主要采用以海藻酸钙为壁材的单层包埋。曹永梅等111将双歧杆菌冷冻干燥菌粉与低聚糖及淀粉一起分散于熔化的氢化油脂中作为芯材。明胶倮胶溶液作为壁材.同时通过一同心双层喷嘴滴人流动的冷却油中。形成微胶囊化双歧杆菌颗粒。该双歧杆菌颗粒保存时间长,菌体存活率高。刘丽英等…l改用海藻酸钠为壁材,CaCI:为同定液.挤压制得直径为2—3mm之间的乳酸菌微胶囊,验证了海藻酸钠作为乳酸菌微胶囊的壁材,具有良好的乍物相容性和肠溶性。但干燥对于微胶囊中乳酸菌的存活率有很大影响。戚薇等【-2l在湿菌泥和海藻酸钠的混合液中添加了一定量的胶体.用注射器针头将双歧杆菌与海藻酸钠的混合液滴人CaCl:溶液中,形成胶体和海藻酸钙双层凝胶珠。然后与壳聚糖溶液进行成膜反应。制得双歧杆菌微胶囊凝胶珠。以该法制得的微胶囊菌体的存活率较高(93%),能抵抗胃酸,并能有效地延长菌体的保存期。2.1.2交联法最初由Groboillot等1131和Caroline等ll乱分别用该法。采用不同的壁材对乳酸菌进行了包被。由于所用的交联剂都有一定毒性.会对乳酸菌的活性造成损害,但是交联剂的浓度越大,胶囊的强度越好。该产品用于乳酸发酵后。活菌含量会随发酵时间的延长而恢复。国内李武明等IbJ分别选取了壳聚糖/对苯二酰氯、邻苯二甲酸醋酸纤维(CAP)、聚一L一赖氨酸(P1.L),海藻酸钠、壳聚糖力每藻酸钠为壁材,采用表面交联技术,●r—D∞SCIENCE食品科技ANDTECHNOL06y将双歧杆菌微胶囊化.结果得出壳聚糖/’海藻酸钠为壁材制备的微囊效果最佳。将微囊后的的双歧杆菌培养12h后活菌含量达7.5x109efu/mL,仍然保持较高的活性.且能在微囊巾继续增殖。曹永梅等f101则将浓缩菌液与海藻酸钠溶液混合均匀后,加入植物油中,搅拌形成均匀混浊乳状液,然后快速加入CaCl:水溶液。直至W/O乳状液被破坏,形成海藻酸钙胶粒.用乳化交联法实现微胶囊化。微胶囊化双歧杆菌经人工胃液处理后存活率比未微胶囊化产品提高了4个数量级;微胶囊化后双歧杆菌的耐热性较强,在50℃时的存活率提高了3个数量级,而未微胶囊化产品在55℃已无活菌存在,微胶囊化产品在60℃处理3min仍有部分活菌。可见微胶囊壁材作为一种物理屏障,减缓了热传递过程。2.1.3喷雾法吉冈俊满等fI睬用喷雾冷却法进行的双歧杆菌微胶囊化,双歧杆菌菌粉与脱脂奶粉、淀粉等保护剂混合均匀后,分散于熔点高于体温的硬化油中,搅拌均匀后用泵以一定流量从喷嘴中喷出.冷风与其成反平行流,在室内形成喷雾,得到的是多核微胶囊化双歧杆菌。产品具有肠溶性,在胃液中存活率较高。但双歧杆菌分散不均匀且制备过程中死f率高。也有不少研究常使用喷雾干燥法微胶囊化益生菌。曹永梅f101曾试图用喷雾十燥工艺制备活菌粉,但发现活菌的存活率只有万分之几。远远达不到冷冻干燥的水平,称基本没有工业化的可能性。可是,魏华等【・,噪用喷雾干燥方法。对保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌进行微囊化。发现微胶囊化产品的活菌保存期显著延长.且与传统的酸奶发酵剂相比,缩短了乳酸菌的凝乳时问.降低了接种菌量。冷冻干燥工艺结合微囊化技术.可获得较高存活率的乳酸菌活性,微囊化技术可提高菌体的抗热性以及活菌的存活率。刘绘景等¨8选择了3株长双歧杆菌和2株婴儿双歧杆菌与分别含有明胶、树胶和可溶惟淀粉一起喷雾f燥。发现喷雾十燥后双歧杆菌存活冈种类而异。同时也取决于所用载体以及喷嘴排出气体的温度。孙俊良等f191以阿拉伯胶、B一环糊精、可溶性淀粉、明胶、脱脂奶粉为壁材。根据正交试验确定了’嗜酸乳杆菌微胶囊化的最佳真空喷雾干燥进风温度、壁材浓度和芯材浓度,得到最佳的微胶囊粒子直径平均为20“m,微胶囊的热稳定性较好。2.1.4相分离法最初是源于Pranee用海藻酸钠将乳酸菌包被,用于乳酸的生产。发现生产性能良好,并且这种乳酸菌微胶囊可以重复使用闭。Sheu等fzIJ用油相分离法制得的乳酸菌微胶囊,使乳酸菌的防冻能力提高了,mF000¥CIEWCf^ND食品科技TECHNOLOGr一工艺技砸2.1.6熔化分散冷凝法在丸山哲彦171的专利中.他们以双歧杆菌冻干粉和棕榈油的混悬液为芯材。将其分散于40"C的10%明胶溶液中,然后迅速倒入5'E的色拉油中。快速搅拌,冷却固化得到明胶凝胶包埋的双歧杆菌,进一步甲醛固化、十燥,得到干燥的微胶囊。横田丰一等嘲采用此法将双歧杆菌粉分散于融点高于体温的硬化油中,搅拌均匀后喷雾。得粒径40—601.Lm的微胶囊,产晶在模拟胃液中存活率达到90%以上。2.1.7吸附法袁杰利等1281以淀粉和碳酸钙粉末吸附双歧杆菌在干燥过程中死亡率明显下降,在室温条件下保存其存活率比未微囊化的有较大提高。姚卫蓉等1291用40%20%。50%.同时他们也把这项技术应用到双歧杆菌上.效果同样显著。Khalil等嘴浓缩双歧杆菌液与海藻酸钠溶液混合均匀后加入植物油中,搅拌至形成一个无明显水相的W/O乳状液。然后快速地加入CaCI:水溶液,形成包埋有双歧杆菌的海藻酸钙胶粒。李祥明等1231用明胶和阿拉伯胶采用复凝聚法包被乳酸菌.延长了菌体在液相中的存活时间,贮存稳定性也有所增加。在余冬生等㈣的研究中发现,与海藻酸钠微胶囊比较.水相分离法制备很到的明胶一阿拉伯胶微胶囊更适合双歧杆菌微胶囊化,双歧杆菌存活数目较多。2.1.5流化床包膜法早在1988年.日本的Kim等【25l将菌体浓缩液或经冷冻干燥后的干菌粉通过挤压制成球状于颗粒,在流化床上用肠溶性材料(海藻酸钠等)喷雾涂膜,产品在室温贮藏时涂膜的比未涂膜的存活率高40倍,在低pH下贮藏时涂膜的存活牢也较高。玉米多孑L淀粉吸附活菌。喷雾十燥隧风温度1700C,出风温度65℃),将喷雾干燥的活菌粉装入肠溶胶囊制成肠溶性活菌粉胶囊。研究证明用多孔淀粉吸附双歧杆菌后不仅在喷雾干燥过程中,而且在贮藏过程都对其存活率有较好的保护作用,被吸附微囊化菌体的存活性能要优越于不用多孔淀粉吸附直接冷冻干燥的活菌粉。刘萍【,o眨用微孔淀粉吸附乳酸菌。以海藻酸钠作壁材,制备乳酸菌微胶囊,同样也得到较好的包埋效果。2.2其他菌的微胶囊化最近.在闰内也涌现了其他一些单一菌的微胶囊化研究,如表3所示。杨汝德等吲每短双歧杆菌、两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌的混合菌粉.连同高效活菌保护剂和双歧促生因子一起作为核心物质.采用流化床包膜法制备得到耐酸肠溶微囊益生菌。微囊在人工模拟胃液(pro.5~2.0)中处理2h。其中的双歧杆菌活菌数仍保持在90%以上;在人工肠液中处理15rain,微囊全部崩解释放出活性菌;在37℃下保存3个月,其中的活菌数仍大于109cfu/mL。表3其他单一菌种的微胶囊化研究进展随着工业的需求,除了微胶囊包埋这些单一菌种外.还有一些研究开始扩展到混合微生物菌种的微胶囊包被。如黄文等1361选择变性淀粉、阿托伯胶、糊精、玉米糖浆用作壁材。通过喷雾干燥法制备微胶囊型微生物活菌制剂,确定微生物活菌制剂微胶囊壁材的比例为变性淀粉40%、阿拉伯胶15%、麦芽糊精25%、玉米糖浆20%。提高了微生物活菌制剂对制粒高温加热处理的抵抗能力,延长了微乍物活菌制剂的储藏存活时间。刘海琴等f轫利用海藻酸钠和聚乙烯醇,将含有硝化细菌、反硝化细菌、光合细菌、放线菌等菌体的复合微生物固定化,研究其对人工废水与鱼塘水的脱氮效果。复合微生物经固定化后.可有效缩短脱氮时间,增强水体脱氮效果,但菌体维持活性的时间较短。3结束语日前,微胶囊包埋技术已成功应用于益生菌活菌制剂的生产,并取得了显著的效果,这对推动益生菌活菌制剂和益生菌系列产品的生产将起到一定的积极推动作用。开辟了益生菌活菌制剂保存技术的新领域。不过,益生菌菌种资源相当有限,有待进一步开发和育种。而我圈的微胶囊包埋技术研究起步相对较晚,有些工艺方面还相对薄弱,产品在耐热、耐酸以及存活率等方面还存在一定缺陷。需要进行更加深入的研究才能更好的应用于大规模工业生产。另外.微胶囊化益生菌不仅仅只适用于食品业.在生物工业中也有广泛应用,至于它在其他科学领域工艺技雍■中的价值还有待进一步的研究和开发。参考文献:【l】GB16321—2003,乳酸茵饮料卫生标准【S1【2lHooverDG,etal.Bifidobacteria:activityandpotentialbenefits.FoodTechn01.1993,6:120immobilizedincalcium食一品一科一按“alginate【J】.JFermentTechnol,1982,60(6):595.598.【21】SheuTY,eta1.MicroentrapmentofLactobaciUiincalciumalginateGels[J1.JFoodSei,1993,54(3):557.[22】KhalilAI-I,MansourEKAlginateencapsulatedbifr-dobacteriasurvivalin【3】张明江,孟祥晨.提高食品中益生茵数量的两大新技术阴.现代食品科技,2005,21(4):90—92【4】Hekmat,S.,MacMahon,DJ-SurvivalofLactobacilhsacidophilusandBifidobacteriumbifidumintheicecreamforprobioticUSea8mayonnaise[J].J.FoodScience,1998,63(4):702【23】李祥明,张均利,常维山.乳酸茵微胶囊化的研究们.饲料研究,1998。12:23.【24】余冬生,李次力,屈胜海等.双歧杆菌培养体系研究和微胶囊化.哈尔滨商业大学学报(自然科学版).2002,18(2):214.一216food叨.JournalofDairyScience,1992,75(6):1415一1422.【5】吴克刚.益生茵的生理功能及微胶囊化的必要性和方法【J】.广州食品工业科技,2004,20(增刊):69—72f6】李良,魏庆梅,杜鹃,等.双歧杆茵微胶囊技术及应用【J】.中国乳品工业.2006.34(5):39—42【71丸山哲彦JP6l一151127,1986【8】藤原正弘.JP01—228456,1988【9】Chuo-ku,Osaka-shi,Osaka-fu,EP634167.1994【25】KimHS,etalMethodforpreparationofstabilemicroencapsulated.1acticacidbacteria【J】JournalofIndustrialMicrobiology,1988,(3):253【26J杨汝德,张丽君,陈惠音,等.双歧联菌株微胶囊的制备条件m.华南理工大学学报(自然科学版),2001,29(10):6—9【27】横田丰一.JPIM-41434,1992【28】袁杰利,金晓艳,代军.双歧杆菌微囊化的初步研究.中国微生态学杂志.1994,6(2):19—20129】姚卫蓉,钱科,姚惠源.双歧杆菌活茵粉的制备.无锡轻工大学学报.2002.21(6):569—573【30】刘萍.微孔淀粉包埋乳酸茵的技术研究【J】.中国食品添加剂。2005,(1):38_4l【101曹永梅.微胶囊双歧杆菌的研究IDI.无锡轻工大学博士学位论文.1998【11】刘丽英,张日俊.乳酸菌的微胶囊化包被g[J1.饲料工业,2003,24(6):16—18【12】戚薇,杨泽字。杜连祥.双歧杆菌微胶囊的制备和稳定性研究【J】.现代食品科技,2005,21(4):35—37【13】GroboillotAF,etaLMembranelinkingofchitosanformationbyinterfacialcross-oflactieoecus【3l】于炜婷,雄鹰,刘袖洞,等.海藻酸钠一壳聚糖微胶囊作为肠道内生化微反应器的研究fj】.高等学校化学学报,2004,25(7):1381—1383formicroencapsulationlactis[J】.BiotechBioeng,1993,42:l157-1163.[14】CarolineL,Hyndman,etlactiswithinaLMicroencapsulationoflactocoecus【32】柴鼓,梅乐和,姚善泾.液芯CMC—ALG微胶囊的制备、扩散性能及初步应用研究【J】.膜科学与技术,2004,24(3):10-14cross-linkedgelatinmembranes【J】.JChemTechBiotechnol,1993.56:259-263.【15】李武明,张玲华,杨汝德.双歧杆茵的微囊化研究【J】.广东药学院学报.1997,13(4):222--225.【161吉冈俊满,未村利ltg.jP04—82827,1992【17】魏华,李雁群,付金衡,等.乳酸茵微囊化的初步研究叨.中国乳品工业.1998,26(6):13.16【18】刘绘景,陆海霞,楼加佳,等.喷雾干燥对双歧杆菌存活【33】梅乐和,章小忠,艾碧英,等.SMNaCS—CaClJPMCG微胶囊固定化枯草杆菌HL—l发酵生产纳豆激酶[Jl,化工学报,2004,55(8):1319—1323【34】张杰,李晓晖,张代佳,等.克雷伯氏杆菌的固定化及其在微胶囊中生长状况的研究叨.生物加工过程,2005,3(3):58-63影响的研究【J】,食品与机械,2004,20(3):1l—12,22f19】孙俊良,赵瑞香,王大红,等.嗜酸乳杆茵真空喷雾干燥微【35】朱丽云,马良进,孙培龙,等.苏云金杆菌微胶囊剂的研制fJ】.农业环境科学学报。2005,24(5):966—969【36]黄文,王益,谭军.饲用微生物添加荆的微胶囊包被研究【J】.粮食与饲料工业,2002,(7):24_25【37】刘海琴,韩士群,李国锋.固定化复合微生物对废水的脱胶囊化技术的研究m农业工程学报,2006,22(5):161—164【20】PraneeT.LacticacidproductionbyanewLactobacillusspsp,LactobacillusvaccinostercusKozakiandOkadanov,氮效釉J】.江苏农业科学,2006,(6):432434、、.¨…一…¨-..+十¨….-.......-.-+”-.-....¨…...-.¨…...…¨一~¨一.…..+…¨...,q垃砸囝

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