货号：QS3404-25 规格：25管/24样
可溶性淀粉合成酶（Soluble starch synthase，SSS）试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
测定原理：
SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，
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在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制：
提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存； 液体一：7mL×1瓶，4℃保存； 液体二：4mL×1瓶，4℃保存； 液体三：8mL×1瓶，4℃保存； 粉剂一：1支，4℃保存； 粉剂二：1支，4℃保存； 粉剂三：1支，-20℃保存； 粉剂四：1支，4℃保存； 粉剂五：1支，4℃保存； 粉剂六：1支，-20℃保存； 粉剂七：1支，-20℃保存； 粉剂八：1支，4℃保存； 粉剂九：1支，4℃保存； 粉剂十：1支，-20℃保存；
试剂一：液体×1支，-20℃保存；临用前加入250μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的 试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入250μL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的 试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉
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剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液制备：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、在EP管中按顺序加入下列试剂 试剂名称（μL） 测定管 样本 150 反应液Ⅰ 270 混匀，30℃保温20 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
反应液Ⅱ 150 混匀，30℃保温30 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），
冰浴冷却，10000g 25℃离心10min，取上清液 上清液 450 反应液Ⅲ 300 试剂一 10 试剂二 10 混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。 注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
SSS活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T×稀释倍数 =522×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。 2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（V样÷V样总×W）÷T×稀释倍数=522×ΔA÷W
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V 反总：反应体系总体积，5.7×10 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.15 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；稀释倍数：1.71；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
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