人骨髓抑制因子1（MPIF-1/CCL23）ELISA分析检测试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（MPIF-1/CCL23）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人骨髓抑制因子1（MPIF-1/CCL23）水平。用纯化的转化生长因子（MPIF-1/CCL23）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（MPIF-1/CCL23），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子（MPIF-1/CCL23）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人骨髓抑制因子1（MPIF-1/CCL23）浓度。 试剂盒内容及其配制 ： 试剂盒成份 96孔配置 48孔配置 96/48人份酶1块板半块板标板 （96T） （48T） 塑料膜板盖 1块 半块 标准品：1瓶1瓶100ng/ml （1.0ml） （0.5ml） 1瓶1瓶空白对照 （1.0ml） （0.5ml） 标准品稀释缓1瓶1瓶冲液 （8.0ml） （4.0ml） 生物素标记的1瓶1瓶抗OT抗体 （8.0ml） （4.0ml） 亲和链酶素1瓶1瓶（5ml） -HRP （12ml） 1瓶洗涤缓冲液 1瓶（10ml） （20ml） 1瓶1瓶底物A （6.0ml） （3.0ml） 1瓶1瓶底物B （6.0ml） （3.0ml） 1瓶1瓶终止液 （6.0ml） （3.0ml）
试剂盒组成： 试剂盒组成 说明书 封板膜 密封袋 酶标包被板 标准品：45μmol/L 标准品稀释液 酶标试剂 样品稀释液 显色剂A液 显色剂B液 终止液 浓缩洗涤液 48孔配置 1份 2片（48） 1个 1×48 0.5ml×1瓶 96孔配置 1份 2片（96） 1个 1×96 0.5ml×1瓶 保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 3ml×1瓶 6ml×1瓶 （20ml×20倍）×1（20ml×30倍）瓶 ×1瓶 自备材料 ： 1. 蒸馏水。 2. 加样器：5ul、10ul 、 50ul 、 100ul 、 200ul 、500ul、1000ul。 3. 振荡器及磁力搅拌器等。 样品收集、处理及保存方法 ： 1、血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 ×g离心30分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液……1000 ×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 ×g离心10分钟，取上清液。 5、 保存……如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 人骨髓抑制因子1ELISA试剂盒操作注意事项： ● 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 ● 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 ● 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 ● 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
● 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
● 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
● 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 ● 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
安全性 ：
1. 避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2. 实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
试剂的准备 ：
1. 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行： 100 （6号标原倍浓度不用稀释直ng/ml 准品） 接加入50ul 50 （5号标100ul的原倍标准品ng/ml 准品） 加入100ul的标准品
稀释液
25 （4号标100ul的5号标准品加ng/ml 准品） 入100ul的标准品稀
释液
12.5 （3号标100ul的4号标准品加ng/ml 准品） 入100ul的标准品稀
释液
6.25 （2号标100ul的3号标准品加ng/ml 准品） 入100ul的标准品稀
释液
3.12 （1号标100ul的2号标准品加ng/ml 准品） 入100ul的标准品稀
释液
0 （空白对原倍浓度不用稀释直ng/ml 照） 接加入50ul
2. 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
试剂盒性能 ：
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。 2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
人骨髓抑制因子1ELISA检测试剂盒 操作步骤：
1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 3. 加入稀释好后的标准品50ul 于反应孔、加入待测样品 50 ul 于反应孔内。立即加入 50 ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。
4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。 6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。
8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
结 果 判 断 与 分 析 ：
1、 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值为纵坐标（ Y ），相应的 OT 标准品浓度为横坐标（ X ），做得相应的曲线，样品的 OT 含量可根据其OD 值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3、 检测值范围： 0-100ng/ml 4、 敏感度：0.39ng/ml
