植物营养与肥料学报２０１５，２１（４）：１０２２一１０３１ＪｏｕｍａｌｏｆＰｌａｎｔＮｕｔｒｉｔｉｏｎａｎｄＦｅｒｔｉｌｉｚｅｒｄｏｉ：１０．１１６７４／ｚｗｙｆ．２０１５．０４２２ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｌａＪｌｔｎｕｔｒｉｆｅｒｔ．ｏｒｇ大豆连作土壤线虫群落结构的影响王进闯１一，王敬国ｈ（１中国农业大学资源与环境学院，农业部植物营养学重点实验室，北京１００１９３；２中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，海南海口５７１１０１）摘要：【目的】由根系活动引起的根际微生态系统的改变，特别是病原生物数量的增加是导致作物产生连作障碍的主要因素。其中，植生性病原线虫的危害是大豆连作障碍产生的重要原因之一。由于植生性病原线虫的存在往往受到其它营养类型线虫的影响，因而从线虫群落结构进行分析，不仅可以更好地反映不同营养类型的线虫之间的相互关系，而且能全面了解土壤的健康状况。本文利用末端性片段长度多态性分析（Ｔ—ＲＦＬＰ）和实时荧光定量ＰｃＲ（ｑＰｃＲ）等分子生物学的方法，比较短期连作和长期连作线虫群落的差异，揭示长期连作大豆土壤线虫群落的变化规律，理解线虫群落与植物健康的关系，阐明线虫群落的变化在大豆连作障碍中的作用。【方法】首先，基于１６ｓｒＤＮＡ的Ｔ—ＲＦＬＰ指纹图谱，分析土壤中线虫的物种丰富度和不同大小的末端性片段（Ｔ—ＲＦ）的相对丰度。然后，通过构建克隆文库和系统发育树，鉴定Ｔ—ＲＦ片段对应的线虫种类。最后，利用ｑＰｃＲ，采用绝对定量的方法确定线虫群落的大小。【结果】线虫的物种丰富度随着连作年限的增加呈逐渐降低的趋势。第１年物种丰富度最高，第３年的丰富度显著低于第１年，之后逐渐降低，９年之后保持不变。大豆根际土检测到１６个Ｔ—ＲＦ，且大多数Ｔ—ＲＦ能从克隆文库中鉴定。其中，食细菌线虫（Ａｃｒｏ捌ｏｉｄ∞）是最为丰富的线虫种类。在连作２～３年后，植物寄生线虫相对丰度增加，而在连作后期，植物寄生线虫相对丰度减少。非度量尺度分析（ＮＭＤｓ）示，第１年线虫群落与其余年限分开，而第２和第３年聚集较近，而连作９、１１和１３年后聚集较近。另外，线虫群落结构与ｐＨ、土壤有机质（ｓＯＭ）、速效磷（ＡＰ）、细菌数量和真菌数量相关。线虫群落总丰度呈先增后降的趋势，最高值出现在第６年。线虫的基因拷贝数与土壤ＮＨｆ和染料木因浓度呈显著正相关，而与Ｎ０３＿和细菌的基因拷贝数呈显著负相关。【结论】大豆根际土壤中，线虫群落丰度在连作第２～３年下降最为明显，到第６～９年有一定的恢复，但不能完全修复。大豆种植为第一，基线虫属（５５６ｂｐ）丰度最高。土壤功能正常，连作第２～３年后，摄食性线虫（５５５ｂｐ、５５８ｂｐ、５６０ｂｐ等）丰度增加，线虫浸染机会增加。关键词：连作；大豆；线虫群落；Ｔ—ＲＦＬＰ；定量ＰｃＲ中图分类号：ｓ３４４．４：Ｓ４３２．４＋５文献标识码：Ａ文章编号：１００８—５０５ｘ（２０１５）０４—１０２２—１０ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｓｏｙｂｅａｎｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅｏｎｓｏｉｌｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕＩＩｉｔｙＷＡＮＧＪｉｎ—ｃｈｕａｎ９１１’，ＷＡＮＧＪｉｎｇ—ｇｕｏ¨（Ｊｃｏｆ如鲈矿胍ｏｕｒｃｅｓｏ以Ｅｎ秒ｉｒｏｎ，船ｍｏｆ＆如Ｍｅｓ，ｃ砌ｍ∞ｉ心ｅＡｇｒ把“ｆ￡¨ｍｚｕ凡ｉ＂ｅ璐ｉ巧，／肘（Ｍｊ＆ｙｋ６０ｍ￡ｏ，ｙ矿州ｏｍⅣ以ｍ幻ｎ，＆彬ｎｇＪＤＤＪ刃，吼ｉ№；２眈＂；ｒｏｎ础ｍⅡ蒯科ｏｍＡｃｏｄｅ叫矿聊如ｎｆ船啦Ｍｆ￡ｕｒｎｆＰｒｏ把ｃｆｉｏ凡ｈ疵ｍｅ，ｓｃ如，ｌｃｅ，Ｈ０ｉ幻ｕ，讹ｉ眦ｎ５７ＪＪＯＪ，傩ｉｍ）ｔｏＡｂｓｔｒａｃｔ：【ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ】ｓｏｙｂｅａｎｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｓｎａｍｅｌｙｃｙｓｔｏｆｄｉｓｅａｓｅ—ｃａｕｓｉｎｇｙｉｅｌｄｄｅｃｒｅａｓｅａｎｄｓｏｉｌｓｉｎｃｋｎｅｓｓｉｎｔｈｅｎｏｎｈｅａｓｔｃｈｉｎａｈａｖｅｂｅｅｎａｔｔｄｂｕｔｅｄｒｅｓｏｕｒｃｅｓＣｏｎｔｉｎｕｏｕｓｓｏｙｂｅａｎｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅｍａｙｐｍｖｉｄｅｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｆｏｏｄｆｏｒｓｐｅｅｉ６ｃｐｌａｎｔ—ｎｅｍａｔｏｄｅ（日ｅ把ｒｏｄｅｍｇ如ｉｎｅｓ），ｒｅｓｕｌｔｉｎｇｉｎｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉＶｅａｄＶａｎｔａｇｅｐｌａｎｔ—ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｓｏｖｅｒｂｅｎ幽ｃｉａｌｆｋｅ－ｌｉｖｉｎｇｆｏ瑚ｓ，ｗｉｔｈｒｅｓｕｌｔｉｎｇｅｃｏｎｏｍｉｃｌｏｓｓｅｓ．Ｔｈｕｓ，ａｎｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｎｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅｉｓｏｆｓｏｙｂｅａｎ．ｉｍｐｏｒｔａｎｔａｓｐｅｃｔｏｆｓｏｉｌｓｉｃｋｎｅｓｓＷｅｕｓｅｄｔｏｔｅＨｎｉｎａｌｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｓｏｉｌｆｈｇｍｅｎｔｌｅｎ醇ｈｐｏｌｙｍｏ叩ｈｉｓｍ（Ｔ—ＲＦＬＰ）ｓｏｉｌｓｔａｋｅｎｆ而ｍａａｎｄｆｉｅｌｄＱｕａｎｔｉｔａｔｉＶｅＰＣＲ（ｑＰＣＲ）ａｓｓａｙｓｅｓｔｉｍａｔｅｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｎｌｏｎｇ—ｔｅ珊ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗｉｔｈ收稿日期：２叭４—０３—１７接受日期：２０１４—０５—２７网络出版日期：２０１５—０５—０６基金项目：国家自然科学基金（４０８７１１２１）资助。作者简介：王进闯（１９７６一），男，河北邯郸人，博士，主要从事微生物生态学研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｉｎｃｈｕａｎｇｗａｎｇ＠ｙａｈ００．ｃｏｍ｝通信作者Ｔｅｌ：０ｌＯ一６２７３２１９８，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎ舀ｇ＠ｃａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ万方数据４期ｅｏｎｔｉｎｕｏｕｓｓｏｙｂｅａｎｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅｕｐ王进闯，等：大豆连作土壤线虫群落结构的影响ｌ３ｙｅａｒｓ．１０２３ｔｏＴｈｅｏｂｊｅｃｔｉｖｅｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｉｎＶｅｓｔｉｇａｔｅｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｄｙｎ哪ｉｅｏｆｓｏｉｌｄｕｍｔｉｏｎｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｓｏｙｂｅａｎｐｍｃｅｓｓｅｓｉｎｆｋｅ—ｌｉｖｉｎｇｎｅｍａｔｏｄｅｓａｎｄｐｌａｎｔ—ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｓｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅａｒｅｈｎｋｅｄｔｏｓｏｉｌｓｉｃｋｎｅｓｓ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｗｅｒｅＴ—ＲＦＬＰａｓｓａｙｓｗｅｒｅｔｏｕｓｅｄｔｏｅｓｔｉＩｎａｔｅｓｔｍｅｔｕｒｅｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｎｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｓ．ａｂｕｎｄａｎｃｅｓｏｆｄｉｆｋｒｅｎｔｓｉｚｅｓｏｆＴ—ＲＦＲＦ，ａｃｌｏｎｅ１ｉｂｒａｒｙｗａｓＴ—ＲＦＬＰａｎａｌｙｓｉｓ，ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｔｈｅｓｐｅｃｉｅｓｒｉｃｈｎｅｓｓａｎｄｒｅｌａｔｉＶｅｔｏｄｅｔｅ珊ｉｎｅｄ．ａｓｓｉｇｎｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ搬ｌｉａｔｉｏｎｔｒｅｅｓｐｅｃｉｆｉｃＴ—ｃｏｎｓｔｍｃｔｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｐＭＤ１９一ＴＶｅｃｔｏｒ．ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｗａｓｃｏｎｓｔＩｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅＭＥＧＡｓｏｆｔｗａｒｅｗｉｔｈｔｈｅＫｉｍｕｒａｔｗｏ＿ｐａｒａｍｅｔｅｒｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｉｓｔａｎｃｅｍａｔｒｉｘｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｔｒｅｅｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｄｅｓｉｇｎ．ＦｉｎａＵｙ，ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏａｓｓｅｓｓｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｉｚｅｓｉｎｓｏｉｌｓ．【Ｒｅｓｌｌｌｔｓ】Ｔｈｅｙｅａｒｓｐｅｃｉｅｓｒｉｃｈｎｅｓｓｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｓｄｅｃｒｅａｓｅｄａｒ印ｉｄｌｙｔｏｔｈｅｌｏｗｅｓｔＶａｌｕｅｉｎｔｈｅｎｉｎｔｈａｎｄｔｈｅｎｒｅｍａｉｎｓｃｏｎｓｔａｎｔｆ而ｍｔｈｅｎｉｎｔｈｙｅａｒｔｏｔｈｅｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈｙｅａｒ．ＴｈｅＴ—ＲＦＬＰａｎａｌｙｓｉｓｏｆｎｅｍａｔｏｄｅａｒｅｇｅｎｅｓｈｏｗｓｔｈａｔｔｈｅｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｎｓｏｙｂｅａｎｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｏｆｔｈｅｎｏｎｈｅａｓｔＣｈｉｎａｄｏｍｉｎａｔｅｄｂｙＡｃｒ０６ｅ如ｉｄ邯．ａｒｅＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｓｏｆｐｌａｎｔ—ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｙｅａｒａｎｄｔｈｉｒｄｙｅａｒｏｆｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅｔｏｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｆ而ｍｔｈｅｓｉｘｔｈｙｅａｒ１３ｔｈｙｅａｒ．Ｔｈｅｆｂｅ—ｌｉＶｉｎｇｎｅｍａｔｏｄｅｓａｒｅａｒｅｍｏｒｅａｂｕｎｄａｎｃｅｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｙｅａｒａｎｄｌｅｓｓａｂｕｎｄａｎｃｅｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｙｅａｒａｎｄｔｈｉｒｄｙｅａｒ，ａｎｄｍｏｒｅａｂｕｎｄａｎｃｅｆ南ｍｔｈｅｓｉｘｔｈｙｅａｒｏｎｗａｒｄｓ．Ｎｏｏｍｎｉｖｏｒｅｓ—ｐｒｅｄａｔｏｒｓａｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅｎｏｎｍｅｔｒｉｃｍｕｌｔｉ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｃａｌｉｎｇ（ＮＭＤＳ）ｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔｔｈｅｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｎｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｓｏｉｌｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆ．ｒｏｍｔｈｅ９ｔｈ，１ｌｔｈ，ａｎｄ１３ｔｈｙｅａｒｓｏｕｔｓｉｄｅｏｆｔｈｅｆｉｒｓｔｔｈｒｅｅｙｅａｒｓ．Ｔｈｉｓｒｅｓｕｌｔｓｕｇｇｅｓｔｓｔｈａｔｔｈｅｄｉｆｋｒｅｎｃｅｓｃｌｏｓｅｌｙｃｌｕｓｔｅｒｔｏｇｅｔｈｅｒ，ｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＨｏｗｅＶｅｒ，ｔｈｅｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎＴｈｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｔｏｐａｉｒｗｉｓｅＢｒａｙ—Ｃｕｒｔｉｓｄｉｓｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｈａｖｅｌｅｓｓｃｈａｎｇｅｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｔｈｒｅｅｙｅａｒｓ．ａ１１ｅｈｉｇｈｌｙｄｉｆｋｒｅｄｂｅｔｗｅｅｎｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｙｅａｒｓａｎｄｉｎｉｔｉａｌｙｅａｒｓ．Ｆｕｎｈｅ珊ｏｒｅ，ｔｈｅｉｓａⅡｂｃｔｅｄｂｙａｖａｉｌａｂｌｅＰ，ｓｏｉｌｏ唱ａｎｉｃｍａｔｔｅｒ（ＳＯＭ），ｐＨ，ｂａｃｔｅｒｉａｌｔｏａｎｄｆｕｎｇａｌａｂｕｎｄａｎｃｅ．ｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍｔｈｅｆｌｒｓｔｙｅａｒｙｅａｒ．ｓｉｘｔｈｙｅａｒ，ａｎｄｔｈｅｎｄｅｃｒｅａｓｅｄｆ而ｍｔｈｅｎｉｎｅｔｈｙｅａｒｔｏ１３ｔｈＩｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｎ．ｅｌａｔｅｄｔｏＮＨｆａｎｄｇｅｎｉｓｔｅｎ，ａｎｄｉｓｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｃｏＩＴｅｌａｔｅｄＮｏｆａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌａｂｕｎｄａｎｃｅ．【ｃｏｎｄｕｓｉｏ玎ｓ】Ｔｈｅｓｐｅｃｉｅｓｒｉｃｈｎｅｓｓａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｉｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｉｇｎｉ６ｃａｎｔｌｙｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄａｎｄｔｈｅｔｈｉｒｄｙｅａｒｏｆｓｏｙｂｅａｎｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅ，ａｎｄｒｅＶｉＶｅｄｔｈｅ６ｔｈｔｏｆｏ册ｔｈｅｔｈｅ９ｔｈｙｅａｒｔｏｓｏｍｅｅｘｔｅｎｔ，ｂｕｔｎｏｔｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ．Ｉｎｔｈｅｆｉｒｓｔｙｅａｒｏｆｓｏｙｂｅａｎｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｈｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｓｏｉｌｆｕｎｃｔｉｏｎ．ＩｎｔｈｅｆｏⅡｏｗｉｎｇ２ａｎｄ３ｙｅａｒｓ，Ａｃｒｅ６ｅ幻ｉｄ酷ｉｓｔｈｅｈ噜ｈｅｓｔ，ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｈｅａｌｔｈｙａｎｄｎｏ硼ａｌａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｐｌａｎｔ—ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｉｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈｅｈｉｇｈｒｉｓｋｏｆｄｉｓｅａｓｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．７Ｉ’ｈｅ１０ｗｅｒｒａｔｉｏｏｆｆｂｅ—ｌｉＶｉｎｇｎｅｍａｔｏｄｅｓｔｏｐｌａｎｔ—ｐａＩ．ａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｙｅａｒａｎｄｔｈｉｒｄｙｅａｒｃｏｕｌｄｒｅｓｐｏｎｄｔｏｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｅＶｅｒｉｔｙｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅ．１【ｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅ；ｓｏｙｂｅａｎ；ｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙ；Ｔ—ＲＦＩＰ；ｑＰＣＲ土壤健康是农产品产量和品质的重要保证，土壤生物的群落结构决定了土壤的健康状况，土而壤生物群落结构的变化可作为土壤变化的早期预警生态指标…。线虫群落包括不同营养类群：植物寄生线虫、食细菌线虫、食真菌线虫、捕食性和杂食性线虫，是土壤动物中数量最多、功能最丰富的一类㈨。虫影响着土壤有机质分解和养分循环以及病害的线发生，被认为是土壤健康状况的敏感性指示生物‘３｜。具有刺激作用有关Ｈ‘５Ｊ。短期连作（＜５～６年）可引起大豆胞囊线虫种群迅速增加，导致作物的发病率升高，使大豆减产∽Ｊ。然而，土壤生态系统具有一定的自我修复能力，长期连作的土壤中出现了抑制孢囊线虫的因素一Ｊ。如随着大豆连作年限的增加（＞５～６年），大豆胞囊线虫种群密度减少¨ｊ。虽然长期连作使非抑制线虫土壤转变成抑制线虫土壤的机理仍然不清楚，但普遍认为连作过程中环境变化可能起到驱动作用。连作在改变土壤条件的同时，也改变了土壤线虫的生存环境，导致线虫种群和群落结构的变化。如Ｃａｓｔｒｏ等发现钾（Ｋ＋）、铵态氮（ＮＨｆ）和硝态氮（ＮＯｆ）等无机离子能抑制南方根研究认为，植物寄生线虫中孢囊线虫（Ｈｅｔｅｍｄｅｒａ）属的大豆孢囊线虫（胁据ｒ０如ｍｇ扣ｉ删）是引起大豆连作障碍的重要原因之一，与植物根系释放的化感物质对植物寄生线虫卵的孵化万方数据接线虫（胁ｆｏｉｄｏｇ妒ｅｉ船哪ｉ纪）二龄虫的生长一Ｊ。另植物营养与肥料学报２１卷外，连作土壤引起的土壤微生物群落的变化也是关键的因素。与短期连作相比，长期连作导致微生物寄生到大豆胞囊线虫的数量更多¨引。在一些土壤中，食线虫菌物被毛孢（觑瑙Ｍ￡ｅ耽卿．）属的真菌寄生被认为是主要原因，这些真菌更多地寄生在二龄线虫上，抑制了土壤线虫病害的发生¨１Ｉ。也有人认为，几种根瘤菌和未培养的变形细菌能抑制孢囊线虫¨２｜。近年的研究表明，健康土壤大豆根际微生物具有控制胞囊线虫数量的作用¨０’”Ｊ。目前，关于长期连作影响线虫的研究，大多局限于对特定植物寄生线虫种群如大豆胞囊线虫的影响，而从线虫群落的角度去理解大豆连作的研究鲜见报道。在土壤生态系统中，单个生物群体的存在是多种生物之间和生物与非生物的环境因子之间相互作用的结果，因而利用群落结构作为指标比用单个属或科更全面、更可靠¨４Ｉ，因为这样能够更好地反映土壤生物间的相互关系，更全面地了解土壤健康状况。通常研究土壤线虫群落结构的方法是形态分类，这需要具有分类经验的专业技术人员，而且在鉴定上费时费工，很难在短期内获得结果¨川。同时，鉴定的结果往往是在属、科和营养类群的水平，使生态分析往往比较模糊或表面化¨６｜。形态分类的另一个缺点是只能鉴定成虫标本，而成虫仅是全部线虫群落的很小的一部分Ⅲｏ，不能全面反映土壤的线虫状况。利用分子生物学方法的一个优点是不必分离和培养线虫，仅通过设计引物就可以鉴定一个土壤系统中的线虫群落。末端性片段长度多态性分析（Ｔ—ＲＦＬＰ）已被证实是研究不同生境中线虫群落的有效方法’１８‘２１Ｊ。本文利用Ｔ—ＲＦＬＰ和ｑＰＣＲ技术，研究了长期大豆连作根际土壤中线虫群落的结构和丰度的变化，特别是比较短期连作和长期连作线虫群落的差异。另外，通过相关性分析，确定引起土壤线虫群落变化的主要驱动因子，有助于理解长期连作大豆土壤线虫群落的变化规律。１材料与方法１．１试验区概况供试土壤样品采自于黑龙江省农科院土肥所长期连作试验小区，该试验建于１９９６年，有１～１３年的大豆连作小区。年平均降水５５０ｍｍ，８０％的降水集中于６～９月份，气温波动从一１８℃（一月份）到２３℃（六月份），年霜冻持续１６０天。万方数据１．２大豆品种供试大豆材料为合丰２５号。选用的品种适应性强，且茎秆坚韧、节间短小、结荚密实，因而它有适应性强、高产和早熟等优良特性。目前，合丰２５号是黑龙江省主要的种植品种。２００９年４月，开始种植大豆，播种密度为每平方米３０颗种子，每个样地包括１０行（长×宽为１５ｍ×０．６７ｍ），按当地推荐的施肥量施用底肥（Ｎ５０ｋｇ／ｈｍ２、Ｐ４５ｋｇ／ｈｍ２和Ｋ５０ｋｇ／ｈｍ２）。１．３土壤样品采集与制备在试验田采用“Ｚ”形设点，于２００９年９月１２日大豆成熟期取样，选取种植大豆１、２、３、６、９、１１和１３年的试验小区，收获３０株大豆，连根拔起植株。用抖根法采集根际土，即抖动植株至土壤不再下落，粘在根系的即为根际土壤。土壤样品含水量为（１６±３）％。根际土壤过２ｍｍ筛，去除植物组织和土壤杂质。采集的样品放于冰盒中运回实验室，一２０℃保存。测定土壤样品中的总氮（Ｎ）、有机质（ＳＯＭ）、铵态氮（ＮＨｆ）、硝态氮（Ｎ０ｆ）、交换性钾（ＥＫ）、有效磷（ＡＰ）和ｐＨ［２２｜，类黄酮总量、大豆苷元和染料木素测定用超高效液相色谱（ｕＰＬＣ）心３。２４］，土壤理化性质及类黄酮总量、大豆苷元和染料木素含量见表ｌ。１．４土壤总ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增１．４．１土壤总ＤＮＡ的提取本实验的土壤ＤＮＡ提取采用ＦａｓｔＤＮＡＳＰＩＮＫｉｔｆｏｒＳｏｉｌ试剂盒（Ｂｉｏ１０１，ｃａｒｌｓｂａｄ，ｃＡ，ｕｓＡ）。提取出来的土壤基因组ＤＮＡ在～２０℃冰箱中保存、备用。ＤＮＡ通过１％的琼脂糖凝胶电泳后，用ＤＮＡｇｒｅｅｎ染色，成像系统拍照。１．４．２ＰＣＲ扩增和纯化线虫扩增引物对为ＮＥＭＦｌ（５’一ＣＧＣＡＡＡＴＴＡＣＣＣＡＣＴＣＴＣ一３’）和Ｓ３（５７一ＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＡＧＣＣＧＣＡＧ一３’）¨引。进行Ｔ—ＲＦＬＰ分析时，引物ＮＥＭＦｌ５端用６一羧基荧光素（ＦＡＭ）标记。ＰｃＲ反应体系（５０斗Ｌ）含ＤＮＡ模板ｌ斗Ｌ，ＥａｓｙＴａｑ缓冲液５斗Ｌ，ｄＮＴＰｓ（２．５ｍｍｏＬ／Ｌ）４斗Ｌ，ＮＥＭＦｌ（１０ｍｍｏＬ／Ｌ）０．６¨Ｌ，Ｓ３（１０ｍｍｏＬ／Ｌ）０．６灿，Ｅａｓｙｔａｑ聚合酶（５ｕｎｉｔｓ／ｐＬ）（全氏金）０．６斗Ｌ，双蒸水（ｄｄＨ２０）３８．２斗Ｌ。ＰｃＲ扩增条件为９４℃预变性５ｍｉｎ，３５个循环：９４℃变性１ｍｉｎ，５３℃引物退火４５ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ。最后７２℃末端延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物３恤Ｌ用１％琼脂糖凝胶电泳检测，使用凝胶回收型试剂４期王进闯，等：大豆连作土壤线虫群落结构的影响盒（天根生化科技（北京）有限公司）对ＰＣＲ产物纯化，一２０℃保存。１．５美国），共１０斗Ｌ混合液，然后加到９６孔板，要避免产生气泡，否则可能损坏遗传分析仪。在９５℃变性３Ｔ—ＲＦＬＰ分析在３斗Ｌｍｉｎ，然后迅速移到冰上冷却３ｍｉｎ。在ＡＢＩ３１３０Ｍａ，ＰｃＲ产物中，加人０．６¨Ｌ砌Ｉ性自动测序仪上检测时，电压为２５００Ｖ，电流４０内切酶（Ｔａｋａｒａ），２灿缓冲液，最后用ｄｄＨ：０补足到反应总体积１０山。６５℃，遮光酶切３ｈ。酶切产物用乙醇沉淀法纯化，纯化产物用锡箔纸包裹，在功率２７ｗ。末端带荧光标记的片段能被自动检测到，而其它没有带荧光标记的片断检测不到。用ＰｅａｋＳｃａｎｎｅｒＳｏｆｔｗａｒｅｖ１．０分析Ｔ—ＲＦＬＰ图谱，然一２０℃下保存。在１止酶切纯化产物中加入８．８止甲酰胺，０．２灿Ｒｏｘ１０００内标（ＢｉｏｖｅｎｔｕｒｅｓＩｎｔ．，后将末端性片段（Ｔ—ＲＦ）＞５０ｂｐ的峰高计算不同片段的相对丰度。表１大豆连作根际土壤性质、类黄酮、大豆苷元和染料木素含量Ｔａｂｌｅ１Ｓｏｎｐｒｏｐｅｎｉ鹤ａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒ拍ｏｎｓ０ｖｅｒｏｆｉｓｏｎａｖｏｎ鹤，ｄａｉｄ神ｉｎａｎｄｇｅｎｉｓｔｅｉｎｉｎｔｈｅⅢｚ惦ｐｈｅｒｅｓｏｎｙｅａｒｓｏｆｍｏｎＯ－ｃｒｏｐｐｉｎｇ注（Ｎｏｔｅ）：同列数据是平均值加标准误Ｄａ【ｅｌｅｔｔｅｒｓｍｅａｌｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔａｎｄａｒｅｍｅａｎｓ±ｓＤ（ｎ＝３）．不同的字母表示在Ｐ＜Ｏ．０５水平上年份问存在显著差异ＤｉｆｆｅｒｅｎｔＰ＜０．０５ｄｉ艉ｒｅｎｃｅ锄０ｎｇｄｉ雎ｒｅｎｔｙｅａｒｓａｔｌｅｖｅｌ．数据来源于Ｇｕｏ等［２２１和ｗａＩｌｇ等［２３］Ｄａｔａａｒｅａｄ印ｔｅｄｆｍｍＧｕｏ“Ⅱｆ．［２２］Ｗａｌｌｇ钟口ｆ．［２３｜．１．６克隆及测序分析机选取１７０个白色克隆子，采用菌体直接扩增，检测到的阳性克隆送往测序公司进行测序，测序引物为Ｍ１３—４７。先用ｃｌｕｓｔａｌｘ软件对所得序列去除载体序列∞１，然后利用ＲＤＰⅡ在线数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｄｃｍ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／ＲＤＰ／ｃｇｉｓ／ｃｈｉｍｅｒａ．ｃｇｉ？ｓｕ＝ＳＳＵ）用与Ｔ—ＲＦＬＰ序列相同但不带荧光标记的引物进行ＰＣＲ扩增，扩增条件也与Ｔ—ＲＦＬＰ的相同。以ＰＣＲ产物进行切胶回收纯化。纯化产物采用ｐＭＤ１９一ＴＶｅｃｔｏｒ（Ｔａｋａｒａ）试剂盒连接到载体上，转化感受态细胞（Ｔａｋａｒａ），涂布到含有氨苄青霉素（ＡｍｐｉｃｉＵｉｎ）、ｘ—Ｇａｌ和ＩＩｙｒＧ的ＬＢ（Ｌｕ而ａ—Ｂｅｒｔａｎｉ）去除ＰＣＲ扩增过程中产生的嵌合体。然后用ｃｌｕｓｔａｌｘ和Ｍｅｇａ５．０软件分析比对，采用邻接法培养基上，３７℃过夜培养，约１２ｈ，形成单菌落。随万方数据（ｎｅ培ｈｂｏｒ＿ｊｏｉｎｉｎｇ）构建系统发育树。１０２６植物营养与肥料学报２１卷１．７实时荧光定量ＰＣＲ利用实时荧光定量ＰｃＲ，采用绝对定量的方法确定线虫群落的大小。用阳性克隆质粒绘制线虫基因的定量ＰＣＲ标准曲线。引物为ＮＥＭＦｌ／ＮＥＭ８９６ｒ（５’一ＴＣＣＡＡＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＴＣＴＭＡＣＧ一３’）。实验采用ＰｏｗｅｒＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰｃＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ试剂盒（ＡＢＩ），在７５００ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲｓｙｓｔｅｍ（ＡＢＩ）仪器上进行。实时荧光定量ＰｃＲ２５灿反应体系为：１２．５斗ＬＳＹＢＲＧｒｅｅｎ；弓Ｉ物各１“Ｌ（１０肛ｍｏＬ／Ｌ），５斗ＬｄｄＨ２０，０．５卜ＬＬＢＳＡ（０．１％），模板ＤＮＡ５¨Ｌ。反应程序为：５０℃２ｍｉｎ，启动ｄｕＴＰ防止非特异性扩增；９５℃１０ｍｉｎ，激活热启动酶；然后４５个循环的ＰｃＲ反应：９４℃变性１ｍｉｎ，５３℃引物退火４５ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，７２℃收集荧光信号，最后做溶解曲线。根据标准曲线，用７５００ｓｙｓｔｅｍＳＤＳｓｏｆｔｗａｒｅ（ＡＢＩ）分析定量结果。１．８数据处理利用Ｍｅｎｔａｌｔｅｓｔ确定环境因子对线虫群落的影响。布雷柯蒂斯（Ｂｒａｙ－ｃｕｎｉｓ）距离用来进行非度量尺度分析（ＮＭＤＳ），分析群落的变化。Ｍｅｎｔａｌｔｅｓｔ和ＮＭＤＳ均在Ｒ软件ｖｅｇａｎ软件包中进行。方差分析和相关性分析在ＳＰＳＳ１７软件中进行。２结果与分析２．１线虫群落结构‘线虫的物种丰富度随着连作年限的增加呈逐渐降低的趋势。第１年物种丰富度最高，为１２，第３年的丰富度显著低于第１年（Ｐ＜０．０５），之后逐渐降低，连作９年后达到最小值，为５（图１）。Ｔ—ＲＦＬＰ图谱显示，线虫群落结构在连作期间发生了变化（图２）。大豆根际土检测到１６个末端性片段（Ｔ—ＲＦ），包括：６２ｂｐ、７３ｂｐ、７４ｂｐ、７５ｂｐ、４１６ｂｐ、４１８ｂｐ、５２２ｂｐ、５４９ｂｐ、５５３ｂｐ、５５５ｂｐ、５５６ｂｐ、５５７ｂｐ、５５８ｂｐ、５５９ｂｐ、５６０ｂｐ、５６２ｂｐ。毒萋中７４ｂｐ、７５ｂｐ、５５５ｂｐ、５５６ｂｐ、５５７ｂｐ、５５８ｂｐ、５５９ｂｐ、５６０ｂｐ、５６２ｂｐ为主要片断，其余片断相对丰度均小于５％，且加和小于１１％（图２）。线虫群落在不同连作年限中相对丰度最高的Ｔ—ＲＦ均为５５６ｂｐ，且随连作年限增加呈波动性变化。Ｔ—ＲＦ５５６ｂｐ第１年的相对丰度为８６％，然后分别下降到第２年和第３年的４９％和４１％，在第６、９、１１、１３年，Ｔ—ＲＦ５５６相对丰度又分别增加到６１％、９０％、７５％和７８％。Ｔ—ＲＦ５５５在第１年没有检测到，但在第２年和第３年的相对丰度分别高达１５％和万方数据蜊恤＊２熏蟀们器８１ａ．２型４Ｏｌ２３６９１１１３连作年限（ａ）ＣｒｏｐｐｉｎｇｙｅａｒＳ图１长期连作大豆根际土壤线虫群落的物种丰富度变化Ｆｉｇ．１Ｃｈａｎｇｅｓｏｆｓｐｅｃｉ鹳ｒｉｃｈｎｅｓｓｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｌｌｉｔｉｅｓｉｎｌｏｎｇ－ｔｅｍｃｏｎｔｉｎｕｏ吣ｓｏｙｂｅａｎｍｏｎｏｃｕＩｔｕｒｅ［注（Ｎｏｔｅ）：数据是平均值加标准误Ｄａｔｅａｒｅｍｅａｎｓ±ｓＤ（ｎ＝３）．方柱上不同字母表示在．Ｐ＜０．０５水平存在显著差异ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓａｂｏｖｅｂａｒｓａｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉⅡｂｒｅｎｔａｔＰ＜０．０５ｌｅｖｅｌ（ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＤｕｎｃａｎ’ｓｎｅｗｍｕｌｔｉｐｌｅｒａ“ｇｅＩｅｓｔｓ）．］１９％，然后下降到第６年的７％和第９年的２％，后两年维持在６％和５％。Ｔ—ＲＦ５５７第１年的相对丰度为３％，在第２和第３年分别增加到７％和１１％，之后，维持在３％～４％。Ｔ—ＲＦ７４从第１年的０．６％分别增加到第２、３和６年的２％、８％和１２％，然后分别降到第９、１１和１３年的１％、８％和１０％。Ｔ—ＲＦ５６２和５５８只有前两年能检测到，并且第２年的相对丰度都比第１年的高。Ｔ—ＲＦ５５９先从第１年的２％增加到第２年的５％和第３年的９％，然后在第６年下降到３％，之后没有检测出。Ｔ—ＲＦ５６０从第１年的２％增加到第２年的８％，在从第６年到第１３年期间只有第１１年检测到３％的相对丰度（图２）。２．２线虫群落组成与环境的关系Ｔ—ＲＦＬＰ分析中的大多Ｔ—ＲＦ能从克隆文库中鉴定（图３）。在大豆根际土中，线虫群落由茎线虫属（Ｄｉｆ咖加危淞对应４１６ｂｐ和５５６ｂｐ）、真滑刃属（Ａｐ危ｅｆｅ眦＾圳对应５５３ｂｐ）、拟丽突属（Ａｃｒ０６ｅｆｏｉｄ船对应６２ｂｐ、７４ｂｐ、５５６ｂｐ和５５７ｂｐ）、针属（Ｐｏｒ０￡化聊＾淞对应４１８ｂｐ、５４９ｂｐ、５５５ｂｐ和５５８ｂｐ）、盘旋属（Ｒｏ￡ｙｆｅｗ忍瑚对应５６２ｂｐ）、孢囊属（三ｋｅｒｏ如ｒ口对应５５９ｂｐ和５６０ｂｐ）、中小杆属（讹ｓｏ地０６砒括对应７３ｂｐ、７５ｂｐ和５２２ｂｐ）组成。线虫群落主要分成植食性线虫、食细菌线虫和食真菌线虫，没有检测到杂食性线虫（图３）。４期王进闯，等：大豆连作土壤线虫群落结构的影响化，随着连作年限的增加，线虫群落进一步分化，暗ｏｔｌｌｅｒｓＴ—ＲＦ７４Ｔ—ＲＦ５５５Ｔ—ＲＦ５５６Ｔ—ＲＦ５５７Ｔ—ＲＦ５５８Ｔ—ＲＦ５５９Ｔ—ＲＦ５６０Ｔ—ＲＦ５６２示了连作时间对线虫群落结构并没有恢复。Ｍａｎｔｅｌｔｅｓｔ分析显示环境与线虫群落之间存在显著的关系（相关系数ｒ＝０．３６８，Ｐ＜Ｏ．００１），暗示了环境条件对于群落的变化起到了部分的作用。线虫群落结构与ｐＨ、土壤有机质（ｓＯＭ）、速效磷（ＡＰ）、细菌数量和真菌数量相关（图４）。２．３定量分析连作年限Ｃｒｏｐｐｉｎｇｙｅａｒｓ随着连作年限的增加，线虫丰度逐渐增加，在第６年达到最高值，然后又开始下降（图５）。线虫的基因拷贝数与土壤ＮＨｆ和染料木因（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）浓度呈显著正相关，而与ＮＯｆ和细菌的基因拷贝数呈显著负相关（图６）。＾图２长期大豆连作线虫群落的结构和组成（基于线虫基因的Ｔ—Ｉ帆Ｐ分析）Ｆｉｇ．２ＧＤｍｐｏｓｉｎｏｎｓａｎｄｓｔｒｕｃｔｌＩｒ幅ＯｆｎｅＩｍｔＯｄｅＩ佃ｇ－ｔｅｍ∞ｎ伽ｕｏｕｓｓｏｙｂ咖ｍｏｎ眦ｕｌｔＩｌｒｅ淞ｄｅｔｅｍｉｎｅｄｂｙｔｈｅＴ—ＲＦＬＰ粕ａｌｙｓｉｓｃｏｍｍｌｌｎｉ廿鹤ｉｎｔｈｅＪｌ习化在长期连作情况下，会出现由致病土壤向抑病、Ｉ．、＾ＮＭＤｓ分析显示，第１年线虫群落与其余年限分开，而第２和第３年聚集较近，后面第９、１１和１３年聚集较近（图４）。说明短期连作导致了群落的明显变９９广５５６ｂｐ土壤的转化。例如，许多地方的研究表明持续连作使土壤出现自然抑制病原线虫的现象¨Ｊ。欧洲的５４。，Ｉｂｄ，篙８僦～帆胁印・埘ｓ雌嚣≯ｌ‘一ＡＹ２８４５８３．（ｂｓｆｅ”ｃ｜ｊｌｚ‘占ｆ，．Ⅱｎ七盯Ｈ口Ｐ９７—．到ＬＡＹ２８４６３７坷叼，ｆ绷如＾淞印．・ｌ一Ⅲ食真菌线虫Ｆ衄西ｖｏｒ髓啦≯……一驯ｌ５５７广一ＡＹ２８４６６２．１一Ｃ印砌，Ｄ船ｐ８坶卿ｆ食细菌线虫Ｂａｃ谢ｖｏＩ℃ｓ７４ｂｐｂｐ—吲厂５５５ｂｐ９３广一ＥＵ６６９９１９・Ｃ忉口肌Ｂ舷出葛簧端６～砌一觑８纠ｒ５５５ｂｐ８９Ｉ厂４１８ｂｐＬ５５８ｂｐ植食性线虫Ｐｌａｎｔｐａ瑚ｓｉｔｅｓ９９厂５６２ｂｐ———厂ＬＡＪ９６６５０３琅。纱＾蹦曲淞，Ｄ６淞ｆ淞ＥＵ３０６３５５・胁ｆ伽ｄ白Ⅵｓｃ．Ｉｌ口ｃ枷‘１００ＩＩ９爿５６０ｂｐＬ５５９ｂｐＱ：Ｑ主ｌＦｉｇ．３Ｐｈｙｌｏｇ蚰ｅ６ｃｎｌ拍ｏｎｓＭｐ一Ⅲ…船咖Ｉ燃一ＦＪ４３５７１８．１黝加括ｃ嬲以，Ｐｆｎｓ；万¨７５６７Ｌ广５２２ｂｐｂｐＩ食细菌线虫Ｍｓｕ７３４５２．＾缅Ｄ砌口６硪出ｓｐ．ＩＢａｃ倒ｖｏｒｅｓ１ｏ图３线虫克隆文库系统发育树ｏｆｒｅｐｒ幅蚰ｔａ廿、他ｎｅ瑚ｔｏｄｅｃＩｏｎｅｓｅｑｕｅｎｃ豁万方数据植物营养与肥料学报２１卷图４ＮＭＤＳ分析长期大豆连作的线虫群落结构与环境的关系Ｆｉｇ．４Ｎｏ咖ｅｔｄｃｍＩＩｌｔｉ－ｄｉｍｅ璐ｉｏｎａｌｓｃａｌｉｎｇ（ＮＭＤＳ）ｐｌｏｔｓｓｈｏ、ｖｉｎｇｓ岫ｍａｒｉ蚵ｂｅｔｗ神ｎｎｅｍａｔｏｄｅｃｏ咖∞ｕｎｉ姆ｓｔ瑚ｃｔｌｌｒ骼ｆｒｏｍｔｌＩｅｃｏｎｔｉｎｕｏ哪ｓｏｙｂ朗ｎｍｏｎｏｃｌｌｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍ［注（Ｎｏｔｅ）：ＢＡ一细菌丰度；ＦＡ一真菌丰度；ＡＰ一速效磷；ｓ０Ｍ一土壤有机质．］Ａ’黍辩∞一连作年限Ｃｒｏｐｐｉｎｇｙｅａｒｓ图５长期大豆连作线虫的基因拷贝数变化Ｆｉｇ．５Ｇｅｎｅｃｏｐｉ鹤ｏｆｓｏｉｌｎｅｍａｔＯｄｅｉＩｌｔｈｅｌｏｎｇ－ｔｅ珊ｃｏｎｔｉｎｕｏ吣ｓｏｙｂｅａｎｍｏｎｏｃｕｌｔｌｌｒｅ［注（Ｎ０ｌｅ）：数据是平均值加标准误Ｄａｔｅａｒｅｍｅａｎｓ±ＳＤ（ｎ＝３）．不同字母表示在Ｐ＜Ｏ．０５水平年份间存在显著差异Ｄｉ＆ｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｍｅａＩｌｓｉ驴ｉ６ｃａＩｌｔｄｉ雎ｒｅｎｃｅａｍｏｎｇｄｉ雎ｒｅｎｔｙｅａｒｓａｔＰ＜０．０５ｌｅｖｅｌ（ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＤｕｎｃａｎ’ｓｎｅｗｍｕｌｔｉｐｌｅｍｎｇｅｔｅｓｔｓ）．］的密度Ⅲ１。在我国东北地区，大豆连作前５年，胞ｇ土增加到３５１个，之后开始下降，并在连作１４年后降到２６０个∞Ｊ。本研究结果表明，不同连作年限大豆土壤线虫ｂｐ为优势营养类群，其对应着自由生活线虫类群（图２和３）。说明了在大豆第１万方数据进有机质分解和养分周转速率，有利于增加养分的释放并提高植物对土壤养分的利用旧７｜。在连作２年后，５５６ｂｐ相对丰度减少，５５５ｂｐ、５５８ｂｐ、５５９ｂｐ、５６０ｂｐ和５６２ｂｐ的相对丰度增加，这些Ｔ—ＲＦ片段对应着孢囊线虫（胁￡ｅｒＤ如ｍ）、盘旋线虫（尺。驰础邯）和针属线虫（儿ｍ啦础ｗ）等植食性线虫（图３），说明在２年连作后，植食性线虫增加，大豆易于受到线虫的危害。而且在大豆自毒作用等其他因素的影响下，连作大豆会出现发育不良，致使线虫侵染机会增加旧８｜。寄生线虫对植株同化物、氮素和其它养分的大量消耗，使植物根系受到伤害，生长受阻旧８Ｉ。此外，大豆幼苗的生长不良更容易引起病原微生物的侵染及植食线虫的侵染旧８｜。值得注意的是，第３年连作后，线虫的物种丰富度减少，５６０ｂｐ和５６２ｂｐ对应的植食性线虫没有检测到，而５５５ｂｐ和５５９ｂｐ对应的植食性线虫相对丰度增加，植食性线虫仍然保持着高的相对丰度。可能说明线虫群落内存在种间竞争，而且不同生物间的相互作用，使得一些物种数量降低或者在微生物的作用下减少了线虫的种类旧Ｊ。大豆短期连作减少了土壤食物网中捕食微生物线虫的数量，引起了根际土壤微生态系统破坏的这种现象，也发生在香蕉和苹果连作上¨≯…。然而，随着连作年限的增加，物种的丰富度进一步减少，５５６ｂｐ对应的捕微生物线虫、５５７ｂｐ和７４ｂｐ对应的拟丽突属（Ａｃｒ０６ｅ肠ｉｄ酷）的食细菌线虫增加，而植食性线虫相对丰度减少（图１～图３）。说明在连作超过６年后，线虫以捕微生物线虫为主，可能使病害减轻，但是群落种类数量减少，线虫群落趋于简化。这可能主要是因为在连作６年后，有益微生物对包括植物寄生线虫在内的病原生物产生抑制作用，从而有利于植物根系和植株生长转好口１｜。根系的良好发育，可能为细菌的生长创造了条件，一些机会主义的食细菌线虫（Ａｃｒ０６ｅｆｏｉ拙和朋邯。也０６如厶）数量增多，与植食性线虫竞争，减少了植食性线虫的数量日２Ｉ。土壤线虫群落的变化并不是偶然的，其消长通常受土壤理化性质和微生物的影响口３Ｉ。本研究发现，线虫群落结构受有机质、有效磷和ｐＨ值的影响，而且细菌和真菌的数量也影响着线虫结构（图４）。土壤有机质是影响土壤线虫分布的重要因素旧４｜。土壤有机质为土壤微生物提供了能源，因此增加了微生物的活性和生物量。一些食细菌线虫的增加可能是由于微生物生物量增加引起∞５｜。另外，土壤ｐＨ降低通常减少了细菌生物量而有利于真菌荞麦连作减少了胞囊线虫（胁把ｒ０如ｍ。抛ｎｏｅ）种群囊线虫数量每２５０种类数量和群落结构都发生了不同程度的变化。在种植大豆第１年，５５６年自由生活线虫参与的土壤功能能够正常发挥，促４期王进闯，等：大豆连作土壤线虫群落结构的影响∞墨ｉ童薏萼曩困眭臻ｏ奄瓷３ｔ潮砗ｌｎｏＺ獾∞线虫基因拷贝数对数Ｌｇｎ锄ａｔｏｄｃｇｅｎｅｃｏｐｉｅｓｐｅｒｇｒａｍｄｒｙｓｏｉｌｗｅｉｇｈｔ图６长期大豆连作土壤中线虫群落基因拷贝数和环境因子的关系Ｆｉｇ．６ＮｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕＩｌｉｔｙｇｅｎｅｃｏｐｉ鹤嬲ｓｏｃｉａｔｉｏｎ喇ｔｈｅｎ、，ｉｒｏ砌ｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓｉｎｔｈｅｌｏｎｇ－ｔｅｍｓｏｙｂ啪ｍｏｎｏｃｌｌｌｔｌｌｒｅ生物量，这样的变化能够反映在捕食微生物的线虫群落变化上口６‘”Ｊ。番茄连作过程中，ｐＨ值与垫刃于食微生物线虫对土壤微生物量响应的滞后性引起。有研究发现，线虫数量往往是在土壤中细菌减少几个月后才减少ⅢＪ。在连作９～１３年期间，线虫数量减少，一方面可能由于减少了植食性线虫数量∞Ｊ，另一方面可能是细菌和真菌的数量处在一个较低的水平，不能提供充分的食物。线虫丰度的变化与ＮＨｆ、ＮＯｆ、根系分泌的染料木因和细菌丰度有关（图６）。线虫丰度与ＮＨｆ呈正相关。ｓａｎｃｈｅｚ—Ｍｏｒｅｎｏ等也发现，在不同的耕作模式下，中小杆线虫属（Ｍ部。小血６如ｂ）和拟丽突属（Ａｃｒ０６ｅ如ｉ如ｓ）与ＮＨ？呈正相关，可能增加了Ｎ的矿化旧引。细菌丰度和线虫丰度的负相关说明捕食压力可能影响着总的细菌群落。染料木因与线虫丰度呈正相关。陈宏宇发现，盆栽的敏感大豆品种增加了根际大豆胞囊线虫数量。这说明根际活动刺激了线虫的生长和繁殖∞Ｊ。因此，植物的生理状况对线虫的数量也产生影响。线虫丰度与Ｎ０ｆ呈负相关。已有研究表明，食真菌线虫滑刃线虫属科（批ｗ矗ｉｄ伽）线虫数量呈正相关，还有一些滑刃线虫（却危ｅｆｅＭ危ｏｉｄ酷ｓｐｐ）对ｐＨ值具有较强的忍耐性旧２｜，说明不同的线虫种类对ｐＨ值的响应存在差异，可能引起群落变化。土壤磷含量高能增加线虫的丰度，特别是食细菌线虫数量，改变了食真菌和食细菌线虫数量旧７｜。王邵军等旧副发现，柳杉根际的速效磷与垫刃线虫（７弛Ｍ危ｕｓｐ砌弘印危。如）及居尾滑刃线虫（Ａｐ捌ｅ凡如ｏｉ如ｃｏ唧础把ｏｋ）数量正相关，而与厄萨拉斯螺旋线虫（胁Ｚ泐船ｆｅ凡如ｗ戈Ⅱｆ２ｗ）和双宫螺旋线虫（胁Ｚ泐啦ｎ如ｗ击＾弘￡ｅｍ）无关。这些结果说明连作引起的土壤性质的改变引起了土壤线虫群落的分化。另外，细菌和真菌是捕食微生物的食物来源，微生物的数量对线虫群落结构的调节也十分明显‘３３｜。随着连作年限的增加，线虫群落基因拷贝数逐渐增加，并在第６年达到最高值，然后逐渐减少（图５）。第２～３年线虫数量的增加可能与植食性线虫的数量增加有关。陈宏宇发现，在连作５～６年内大豆胞囊线虫数量呈逐年增加的趋势［６］。我们的研究发现在第６年，细菌和真菌的数量都很少旧９｜，但线虫群落基因拷贝数达到了最大值。这可能是由万方数据（和＾ｅｆｅ聊＾ｏｉ如）与ＮＯｆ具有相关性，ＮＯｆ能通过影响食真菌线虫数量影响线虫的总数量口３１。本研究中并没有检测到捕食／杂食线虫（Ｏｍｎｉｖｏｒｅｓ－ｐｒｅｄａｔｏｒｓ）。这可能是由于研究方法的差异。本研究主要研究根际土，而且ＤＮＡ是从１０３０植物营养与肥料学报２１卷０．５ｇ土壤中提取，不能全面地估计线虫分布。因此，为了更全面研究线虫群落结构，需要经典分类和分子技术相结合脚１或从更多质量的土壤中提取ＤＮＡ，再用高通量的测序方法进行群落结构鉴定‘４３｜。４结论总之，大豆连作改变了线虫群落的结构和数量。在连作早期，植物寄生线虫增加，可能是导致短期连作大豆减产的重要原因，而在连作后期，植物寄生线虫减少，减轻了对大豆的危害，但由于种群趋向单一，产量不稳。线虫群落结构的变化主要受到土壤有机质、ｐＨ值、速效磷、细菌和真菌数量影响。随着连作年限增加，线虫基因拷贝数呈先增后降的趋势，最高值出现在第６年。线虫的丰度与ＮＨｆ和染料木因呈正相关，与细菌的数量和Ｎ０ｉ呈负相关。本研究有利于深入理解大豆连作障碍和长期连作后形成植物寄生线虫的抑病土壤的机制。参考文献：［１］杨树泉，沈向，毛志泉，等．环渤海湾苹果产区老果园与连作果园土壤线虫群落特征［Ｊ］．生态学报，２０１０，３０（１６）：４４４５—４４５１．ＹａｎｇＳＱ，Ｓｈｅｎｘ，ＭａｏｚＱ酣口ｆ．ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｎｔｈｅｓｏｉｌｏｆｌｏｎｇ一８ｔ柚ｄｉｎｇｖｅｒｓｕｓｒｅｐｌａｎｔｅｄａｐｐｌｅｏｒｃｈａｒｄｓｓｕⅡ＿ｏｕｎｄｉｎｇＢｏｈａｉＧｕｌｆ［Ｊ］．ＡｃｔａＥｃｏｌｏ舀ｃａｓｉｎｉｃａ，２０１０，３０（１６）：４４４５—４４５１．［２］邵元虎，傅声雷．试论土壤线虫多样性在生态系中的作用［Ｊ］．生物多样性，２００７，１５（２）：１１６—１２３．ＳｈａｏＹＨ，ＦｕＳＬ．Ｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｓｏｉｌｎｅｍａｔｏｄｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙｓｃｉｅｎｃｅ，２００７，１５（２）：１１６—１２３．［３］ＦｒｅｃｋｍａＩｌＤｗ．Ｂａｃｔｅｒｉｖｏｍｕｓｎｅｍａｔｏｄｅｓａｎｄｏ唱ａｎｉｃ—ｍａｔｔｅｒｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｇＴｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍａ１１ｄＥｎｖｉｍｎｍｅｎｔ，１９９８，２４（１—３）：１９５—２１７．［４］Ｍａ础ｕｎｅＴ，ＡｎｅｔａｉＭ，Ｔａｋａｓｕ矛Ｍ甜８ｚ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ“ａｎａｆｕｒａｌｈａｔｃｈｉｎｇｓｔｉｍｕｌｕｓ，ｇｌｙｃｉｎｏｅｃｌｅｐｉｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９８２，２９７：４９５—４９６．［５］ＨａｌｂｒｅｎｄｔＪＭ．Ａｌｌｅｌｏｐａｔｈｙｉｎｔｈｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｐｌａｎｔｐａｍｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｓ［Ｊ］．ＪｏｕｍａｌｏｆＮｅｍａｔｏｌｏｇｙ，１９９６，２８（１）：８—１４．［６］陈宏宇．不同品种和不同茬口大豆根面及根际的微生物群落结构分析［Ｄ］．北京：中国农业大学博士学位论文，２００５．ＣｈｅｎＨＹ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｎｔｈｅｒｈｉｚ叩ｌａｎｅａｎｄｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅａｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｓｏｙｂｅａＪｌｃｕｌｔｉｖａｒａ１１ｄｃｒｏｐｐｉｎｇｓｙｓｔｅｍ［Ｄ］．Ｂｅ巧ｉｎｇ：ＰｈＤＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ，ｃｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００５．［７］ｃｈｅｎｓ，ＤｉｃｋｓｏｎＤｗ．Ｂｉｏｌｏ西ｃａｌｃｏｎｔｍｌｏｆｐｌａｎｔｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｓ［Ｊ］．Ｍａｌｌｚａｎｉｌｌａ—ｋｐｅｚＲＨ，ＭａｒｂａＩｌ－ＭｅｎｄｏｚａＭＰｍｃｔｉｃａｌｐｌａｎｔｎｅｍａｔｏｌｏｇｙ［ｃ］．Ｇｕａｄａｌａｊａｒａ，Ｊａｌｉｓｃｏ，Ｍｅｘｉｃｏ：万方数据Ｃｏｌｅｇｉ０ｄｅＰｏｓｔ铲ａｄｕａｄｏｓａＩｌｄＭｕｎｄｉ—Ｐｒｅｎｓａ，ＢｉｂｌｉｏｔｅｃａＢａｓｉｃａｄｅＡ萌ｃｕｌｔｕｍ，２０１２．７６１—８１１［８］ｚｈｕＹＢ，ｓｈｉＦＹ，ＴｉａｎＪＱｅ￡口ｆ．Ｅ归ＦｅｃｔｏｆｓｏｙｂｅａＪｌｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅｏｎｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｙｓｔｓｏｆ，＆把ｒｏ出ｍｇ咖ｉ，瑚［Ｊ］．Ｊ０ｕｍａｌｏｆＮｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２０１３，４５（３）：２２８—２３５．［９］ＣａｓｔｍＣＥ，ＢｅｌｓｅｒＮ０，ＭｃｋｉｎｎｅｙＨＥ．ｓｔｍｎｇｒｅｐｅｌｌｅｎｃｙｏｆｔｈｅｍｏｔｋｎｏｔｎｅｍａｔｏｄｅ，胁如坷９９，御ｉ，岫９９ｎｉ抛ｂｙｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｏ唱ａｎｉｃｉｏｎｓ［Ｊ］．ＪｏｕｍａｌｏｆｃｈｅｍｉｃａｌＥｃ０１０９ｙ，１９９０，１６（４）：１１９９—１２０５．［１０］ｓｕｎＭＨ，Ｌｉｕｘｚ．ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｓｏｉｌｓ０ｆｓｏｙｂｅａｎｏｙｓｔｎｅｍａｔｏｄｅｉｎＣｈｉｎａ［Ｊ］．ＡｃｔａＰｈｙｔ叩ａｔｈｏｌｏｇｉｃａｓｉｎｉｃａ，２０００，３０：３５３—３５６．［１１］ｘｉａＪｌｇＭｃ，ｘｉａｎｇＰＡ，Ｊｉａｎｇｘｚ甜ｏｆ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎａＪｌｄｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｎｅｍａｔｏｐｈａｇｏｕｓｆｕｎｇｕｓ日ｉｒｓ“￡ｅ皿ｎｍｉｎ，琊ｏ￡ｅｍ括ｉｎｓｏｉｌ谢ｔｈｒｅａＩ—ｔｉｍｅＰｃＲ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄｓｏｉｌＥｃｏｌｏｇｙ，２０１０，“：１７０一１７５．［１２］ＹｉｎＢ，ＶａｌｉｎｓｋｙＬ，ＧａｏｘＢｅ￡Ｄｆ．ＢａｃｔｅｒｉａｌｒＲＮＡｇｅｎｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｏｉｌｓｕｐｐＩ℃ｓｓｉｖｅｎｅｓｓａｇａｉｎｓｔｔｈｅｐｌａｎｔ—ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅ而『ｅ把ｒｏ如ｍ５ｃ＾Ⅱｃ＾撕［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄａＪｌｄＥｎｖｉｍｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，６９：１５７３一１５８０．［１３］ｃｈｅｎｓＹ．ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ砌ｅｒ０出ｍｇ蜘ｉ麟ｉｎｓｏｉｌｓｆｒｏｍｆｉｅｌｄｓｗｉｔｈｌｏ“ｇ—ｔｅ册ｓｏｙｂｅａＪｌｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＢｉｏｃｏｎｔＩｕｌｓｃｉｅｎｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，１７：１２５一１３４．［１４］ＮｅｈｅｒＤＡ，Ｃ锄ｐｂｅＵＣＬ．ＮｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓａｎｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｂｉｏｍａｓｓｉｎｓｏｉｌｓｗｉｔｈａＪｌｎｕａｌａｎｄｐｅｒｅｎｎｉａｌｃｍｐｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＳｏｉｌＥｃｏｌｏｇｙ，１９９４，１：１７—２８．［１５］Ｉ丑ｗｔｏｎＪＨ，ＢｉｇｎｅｕＤＥ，ＢｏｌｔｏｎＢ以口ｚ．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｖｅｎｔｏｒｉｅｓ．ｉｎｄｉｃａｔｏｒｔａｘａａｎｄｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈａｂｉｔａｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｍｐｉｃａｌｆｏｒｅｓｔ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９１：７２—７６．［１６］ＹｅａｔｅｓＧｗ，ＢｏｎｇｅｒｓＴ．Ｎｅｍａｔｏｄｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎａｇｒｏｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ａ鲥ｃｕｌｔｕｒｅ，ＥｃｏｓｙｓｔｅｍａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，１９９９，７４：１１３—１３５．［１７］ＧｒｉｍｔｈｓＢｓ，ＢｅｎｇｏｕｇｈＡＧ，ＮｅｉｌｓｏｎＲｅ￡ｏｆ．７ｒｈｅｅｘｔｅｎｔｔｏｗｈｉｃｈｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓａｒｅ雒ｂｃｔｅｄｂｙｓｏｉｌｆ如ｔｏｒｓ—ａｐｏｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２００２，４：９４３—９５２．［１８］ｗａｉｔｅＩｓ，Ｏ’ＤｏｎｎｅｕＡＧ，ＨａｒｒｉｓｏｎＡ以Ｄｆ．Ｄｅｓｉｇｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｎｅｍａｔｏｄｅ１８ＳｒＤＮＡｐｒｉｍｅｒｓｆｏｒＰＣＲａｎｄｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｍｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＤＧＧＥ）ｏｆｓｏｉｌｃｏｍ舢ｎｉｔｙＤＮＡ［Ｊ］．ｓｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，３５：１１６５—１１７３．［１９］Ｄｏｎｎｓ，ｃ面脏ｔｈｓＢｓ，ＮｅｊｌｓｏｎＲ封口正ＤＮＡｅｘｔｍｃｔｉｏｎｆ而ｍｓｏｉｌｎｅｍａｔｏｄｅｓｆｂｒｍｕｌｔｉ—ｓ砌ｐｌｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＳｏｉｌＥｃｏｌｏ盱，２００８，３８：２０一２６．［２０］Ｅｄｅｌ－Ｈｅ珊ａｎｎＶ，ＧａｕｔｈｅｍｎＮ，Ａｌａｂｏｕｖｅｔｔｅｃｅ￡ｎｚ．Ｆｉ“ｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｔｏａｐｐｍａｃｈｍｕｌｔｉｔｒｏｐｈｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ枷ｏｎｇｍｉｃｍｎｏｍａｎｄｍｉｃｍｆａｕｎａｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｎｓｏｉｌ［Ｊ］．ＢｉｏｌｏｇｙａＪｌｄＦｅｒｔｉｌｉｔｙＳｏｉｌｓ，２００８，４４：９７５—９８４．［２１］ＰａｌｏｍａＬｒｅｓ—ＲｉｕｓＪＥ，ｃａｓｔｉｌｌｏＰ，Ｍｏｎｔｅｓ—ＢｏｒＩｅｇｏＭ酣Ⅱｆ．Ｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｐ叩ｕｌａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｏｆｃｕｌｔｉＶａｔｅｄｏｌｉｖｅｄｉｆｆｅｒｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｐｌａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅ［Ｊ］．ｓｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａｒＩｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，４５：１６８—１７１．［２２］鲁如坤．土壤农业化学分析方法［Ｍ］．北京：中国农业科技出版社，２０００．ＬｕＲＫ．Ａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｓｏｉｌｃｈｅｍｌｓｔｒｙｏｆａ咖ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｍ］．４期王进闯，等：大豆连作土壤线虫群落结构的影响１０３１Ｂｅ玎ｉ“ｇ：ｃｈｉｎａＡｇＴｉｃｕｌｔｕｒａｌｓｃｉｅｎｔｅｃｈＰｒｅｓｓ，２０００．［２３］Ｇｕｏｚ，Ｋｏｎｇｃ，ｗａｌｌｇＪ甜Ⅱｆ．ＲＩｌｉｚ０８ｐｈｅｒｅｉｓｏｎａｖｏｎｅｓ（ｄａｉｄｚｅｉｎａｎｄｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）ｌｅｖｅｌｓａｎｄｔｈｅｉｒｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｔｈｅｍｉｃｍｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｎｌｃｔｕｒｅｏｆｍｏｎｏ—ｃｍｐｐｅｄｓｏｙｂｅａｎｓｏｉｌｉｎｆｉｅｌｄａｎｄｃｏｎｔｍｌｌｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ｓｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａ１１ｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓ‘ｒｙ，２０１ｌ，４３：２２５７—２２６４．［２４］ｗａＪｌｇＪ，“ｘ，ｚｈａｎｇＪ村ｎｚ．Ｅ艉ｃｔｏｆｒｏｏｔｅｘｕｄａｔｅｓｏｎｂｅｎｅｆｉｃｉａｌｍｉｃｒｏｏ玛ａｎｉｓｍｓ－ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｍｍａｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｓｏｙｂｅａｎｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＰｌａＩｌｔＥｃｏｌｏｇｙ，２０１２，２１３：１８８３—１８９２．［２５］ＬａｒｋｉｎＭＡ，ＢｌａｃｋｓｈｉｅｌｄｓＧ，ＢｒＤｗｎＮＰ酣ｎｆ．Ｃｌｕｓｔａｌｗａｎｄｃｌｕｓｔａｌｘｖｅｒｓｉｏｎ２．Ｏ［Ｊ］．Ｂｉｏｉｒ血珊ａｔｉｃｓ，２００７，２３：２９４７—２９４８．［２６］Ｋｅ。ｒｙＢＲ，ＣｒｕｍｐＤＨ．Ｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｔｈｅｄｅｃｌｉｎｅｏｆｔｈｅｃｅｒｅａｌｃｙｓｔｎｅｍａｔｏｄｅ，麒船ｒｏ如ｍｏ钾Ｍｅ，ｉｎｆｏｕｒｓｏｉｌｓｕｎｄｅｒｉｎｔｅｎｓｉｖｅｃｅｒｅａｌｐｆｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｕｎｄ啪ｅｎｔａｌａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＮｅｍａｔｏｌｏｇｙ，１９９８．２ｌ：６１７—６２５．［２７］Ｆｅ而ｓＨ．Ｆｏ砌ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｍｅｔａｂｏｌｉｃｆ００ｔｐ—ｎｔｓｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｓｉｎｔｈｅｓｏｉｌｆｏｏｄｗｅｂ［Ｊ］．ＥｕｍｐｅａｎＪｏｕｍａｌｏｆｓｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙ，２０１０，４６（２）：９７一１０４．［２８］阮维斌．大豆连作障碍机理及其措施的研究［Ｄ］．北京：中国农业大学博士学位论文，２０００．ＲｕａｎｗＢ．Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｏｙｂｅａｎ（Ｇ蜘ｉＭ盯眦（Ｌ．））ｒｅｐｌａＩｌｔｉｎｇｐｒｏｂｌ帅［Ｄ］．Ｂ蜘ｉｎｇ：ＰｈＤＤｉｓｓｅｎａｔｉｏｎ，ＣｈｉｎａＡｇＩｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０００．［２９］ＬａｔａｌａＰ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｔｒｏｌｏｆｐｌａｎｔ．ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８６，Ｚ４：４５３—４８９．［３０］钟爽，何应对，韩丽娜，等．连作年限对香蕉园土壤线虫群落结构及多样性的影响［Ｊ］．中国生态农业学报，２０１２，２０（５）：６０４—６１１．ＺｈｏｎｇＳ，ＨｅＹＤ，ＨａｎＬＮｅｔⅡｆ．Ｅｆｋｃｔｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｒｏｐｐｉｎｇｏｆｂａｎａｎａｏｎｓｏｉｌｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｎｌｃｔｕｒｅａｎｄｄｉｖｅｒｓｉｔｙ［Ｊ］．ｃｈｉｎｅｓｅＪｏｕｍａｌｏｆＥｃｏ－Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ．，２０１２，２０（５）：６０４—６１１．［３１］ＢｅｒｅｎｄｓｅｎＲＬ，ＰｉｅｔｅｒｓｅｃＭＪ，ＢａｋｋｅｒＰＡＨＭ．７ＩｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅａｎｄｐｌａＩｌｔｈｅａｌｔ｝ｌ［Ｊ］．’１１ｒｅｎｄｓｉｎＰｌ趼ｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０１２，１７：４７８—４９６．［３２］ｗｉｄｍｅｒＴＬ，ＭｉｔｋｏｗｓｋｉＮＡ，ＡｂａｗｉＧｓ．ｓｏｉｌｏ瑁ａｎｉｃｍａｔｔｅｒａｎｄｍａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆｐｌａｎｔ—ｐａｒａｓｉｔｉｃｎｅｍａｔｏｄｅｓ［Ｊ］．Ｎｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２００２，３４（４）：２８９—２９５．［３３］ｓａＪｌｃｈｅｚ—Ｍｏｒｅｎｏｓ，ＭｉｎｏｓｈｉｍａＨ，ＦｅｒｒｉｓＨ酣Ⅱｆ．Ⅱｎｋｉｎｇｓｏｉｌｐｍｐｅｎｉｅｓａｎｄｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ：ｅＨｂｃｔｓｏｆｓｏｉｌｍ肌８９ｅｍｅｎｔｏｎｓｏｉｌｆｂｏｄｗｅｂｓ［Ｊ］．ＪｏｕｍａｌｏｆＮｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２００６，万方数据８（５）：７０３—７１５．［３４］Ｂｒｉａｒｓｓ，ＧｒｅｗａｌＰｓ，Ｓ０ｍａｓｅｋｈａｒＮ以ｎｆ．ｓｏｉｌｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙ，ｏ唱ａｎｉｃｍａｔｔｅｒ，ｍｉｃｍｂｉａｌｂｉｏｍａｓｓａｎｄｎｉｔｍｇｅｎｄｙｎａｍｉｃｓｉｎｆｉｅｌｄｐｌｏｔｓｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉ“ｇｆｒｏｍｃｏｎｖｅｎｔｊｏｎａｌｔｏｏｒｇａｎｉｃｍａ｜ｌａｇｅｍｅｎｔ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄｓｏｉｌＥｃｏｌｏｇｙ，２００７，３７：２５６—２６６．［３５］ＲｕｅｓｓＬ，Ｆｕｎｋｅｗ．Ｅｆｆ毫ｃｔｓｏｆｅｌｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｃｉｄｉ６ｃａｔｉｏｎｏｎｎｅｍａｔｏｄｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｉｎｓｏｉｌｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｐｅｄｏｂｉｏｌｏ矛ａ，１９９２，３６：２３ｌ一２３９．［３６］ｄｅＧｏｅｄｅＲＧＭ，ＤｅｋｋｅｒＨＨ．ＥⅡｂｃｔｓｏｆｌｉｍｉｎｇａｎｄｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｎｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｊｅｓｉｎｃｏｎｉｆｅｒｏｕｓｆｏｒｅｓｔｓｏｉｌｓ［Ｊ］＋Ｐｅｄｏｂｉｏｌｏｇｉａ，１９９３，３７：１９３—２０９．［３７］ｃｈｅｎｘＹ．Ｎｅｍａｔｏｄｅｒｅ８ｐｏｎｓｅｔｏｎｉｔｍｇｅｎａＪｌｄｐｈｏｓｐｈｏｍｓｉｎ觯ｓｓｌａｎｄｓ，ａｓｓｅｓｓｅｄｂｙｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙａｎｄｍ０１ｅｃｕｌａｒｍｅｔｈｏｄｓ［Ｄ］．Ｉｒｅｌａｆｌｄ：ＰｈＤＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ．ＮａｔｉｏｎａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｖｏｆＩｒｅｌａｎｄ—Ｇａｌｗａｙ，２０１２．［３８］王邵军，蔡秋锦，阮宏华．不同牛境柳杉根际线虫群落的生态特征［Ｊ］．生态学杂志，２００８，２７（４）：５８３—５９０．ｗａ“ｇＳＪ，ｃａｉＱＪ，ＲｕａｎＨＨ．Ｅｃｏｌｏ百ｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｎｅｍａｔｏｄｅｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓｉｎｒｈｉｚｏｐｈｅｒｅｓｏｉｌａｔｄｉｆｋｒｅｎｔｈａｂｉｔａｔｓ０ｆｃｒ）弘ｏ，船砌加疗ｕ埘［Ｊ］．ｃｈｉｎｅｓｅＪｏｕｍａｌｏｆＥｃｏｌｏｇ）『，２００８，２７（４）：５８３—５９０．［３９］王进闯．大豆连作对根际土壤生物的影响［Ｄ］．北京：中国农业大学博士学位论文，２０１４．ＷａＪｌｇＪＣ．ＴｈｅｉｍｐａｃｔｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｓｏｙｂｅａＩｌｍｏｎｏｃｕｌｔｕｒｅｏｎｓｏｉｌｃｏｒＩｌＩｌｌｕｎｉｔｉｅｓｉｎｔｈｅｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ［Ｄ］．Ｂｅ玎ｉｎｇ：ＰｈＤＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ，ＣｈｉｎａＡ鲥ｃｕｌｔｕ同Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１４．［４０］ＰａｐａｔｈｅｏｄｏｒｏｕＥＭ，ＡｒｇｙｒｏｐｏｕｌｏｕＭＤ，ｓｔａｍｏｕＧＰ．Ｔｈｅｅ‰ｃｔｓｏｆｌａｒｇｅａｎｄｓｍａｌｌ—ｓｃａｌｅｄ证ｋｒｅｎｃｅｓｉｎｓｏｉｌｔｅｍｐｅｒａｔｕＴｅａｎｄｍｏｉｓｔｕｒｅｏｎｂａｃｔｅｒｉａｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｔｈｅｃｏｍｍｕｎｉｔｙｏｆｂａｃｔｅｒｉＶｏｍｕｓｎｅｍａｔｏｄｅｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌｉｅｄＳｏｉｌＥｃｏｌｏｇｙ，２００４，２５：３７—４９．．［４１］ｗａｒｄｌｅＤＡ，ｗｉｌｌｉ枷ｓｏｎｗＭ，ＹｅａｔｅｓＧｗ以ｏｆ．７蹦ｃｋｌｅ—ｄｏｗｎｅ＆ｃｔｓｏｆａｂｏｖｅｇｍｕｎｄｔｒｏｐｈｉｃｃａｓｃａｄｅｓｏｎｔｈｅｓｏｉｌｆ００ｄｗ幽［Ｊ］．０ｉｋｏｓ，２００５，１１１：３４８—３５８．［４２］ＴａｍｕｒａＫ，ＰｅｔｅｒｓｏｎＤ，ＰｅｔｅｒｓｏｎＮ以ｏｚ．ＥＧＡ５：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅＶｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｇ。ｎｅｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｕｓｉｎｇｍａｘｉｍｕｍｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ，ｅＶｏｌｕｔｉｏｎａｒｙｄｉｓｔａｎｃｅ，ａＩｌｄｍａｘｉｍｕｍｐａｒｓｉｍｏｎｙｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．ＭｏＩｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＥｖｏＩｕｔｉｏｎ，２０ｌｌ，２８：２７３１—２７３９。［４３］ＦｌｏｙｄＲ，ＡｂｅｂｅＥ，Ｐ８ｐｅｎＡｅｆｏｆ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｒｃｏｄｅｓｆｏｒｓｏｉｌｎｅｍａｔｏｄｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＥｃｏｌｏｇｙ，２００２，１ｌ：８３９—８５０大豆连作土壤线虫群落结构的影响
作者：作者单位：
王进闯， 王敬国， WANG Jin-chuang， WANG Jing-guo
王进闯,WANG Jin-chuang(中国农业大学资源与环境学院,农业部植物营养学重点实验室,北京100193;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南海口571101)， 王敬国,WANG Jing-guo(中国农业大学资源与环境学院,农业部植物营养学重点实验室,北京100193)植物营养与肥料学报
Plant Nutrition and Fertilizer Science2015,21(4)
刊名：英文刊名：年，卷(期)：
报 2015(4)
引用本文格式：王进闯.王敬国.WANG Jin-chuang.WANG Jing-guo 大豆连作土壤线虫群落结构的影响[期刊论文]-植物营养与肥料学
