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ｌ２２ 告ｌ蛐下 １测定对象 例ｆ年龄４７－－７９岁。 ２方法与结果 对照组５０例为同期来我院健康体检的正常人。其中男３６ ＾，女ｌ４人；年龄５０－－６６岁。肺心病患者为近两年在我院住 院的病例，均符合垒国第二次肺心病会议制定的诊断标准。其 中代偿期组４８例，失代偿期组３７例，８５倒中男６９倒，女１６ 表ｌ 对照组和肺心病患者，均在清晨空腹抽取静脉血。标本罘 集后在４小时内用美国ＢＥｃＫＭＡＮ ｅｘ５型垒自动生化分析仪 及其原装生Ｉ［匕试剂测定，正常值是本院检验科测得资料，结果 见表１、２。 五种血清酶活性与病情关幕（ 土ｓ，ｉｕ／Ｌ） 曲 帖 代偿期组ｆｎ一４８） １２ ２ｊ ３７ ７７ ０８ ＜０．０１ １ ４ ２７ １７ 戋代偿期组（ｎ一３７ ｌ５ ４０．５４ ２０ ５４．１ ３讨论 成溶酶膜破裂，引起心肌细胞自溶。由于能量不足，细胞蛋白 质合成与分解失衡，影响生物合成和修复过程，使细胞膜通透 三＝ 蜘 性发生不可逆的改变，从而使各种酶释放到血清中，是五种血 从表１看出本文肺心病组患者无论是代偿期或是失代偿 期，五种血清酶插性的均值都高于对照组，而失代偿期又显著 高于代偿期组 其中ＡＳＴ、ＣＰＫ和Ｔ－ＧＴ三种血清酶活性在代 偿期中，虽其均值未超过正常值的上限，但与对照组相比差异 仍然明显。从表２亦看出失代偿期中，每种酶活性增高的倒数 清酶活力增高的主要原因。 上述五种酶主要分布于心、肝、肾和骨骼肌等，其中ＡＳＴ、 ＣＰＫ、ＨＢＤＨ主要分布在心肌组织中ｆＬＤＨ丹布广泛，在心肌、 ” 也明显高于代偿期组。因此，我们认为五种血清酶的活性与肺 心病的病情有密切的关系。 慢性肺原性心脏病主要病理改变是右室肥厚、扩张乃至右 心衰竭。在多种因素作用下，引起不同程度的心肌块血、块氧。 在这种情况下，心肌细胞能量代谢和钠泵功能障碍，细胞肿胀， 细胞膜的邋透性增高，细胞内二磷酸腺苷和三磷酸腺苷水解造 肝、骨骼肌、肾皮质、肺、红细胞内较丰富；７一（ Ｔ主要在肾、 胰、肝、心肌等组织 尽管后两者诊断作用受到一定，但 本文认为只要通过临床观察分析及相关辅助检查，仍然可 排 除其它一些脏器组织受损的影响，较多地考虑心肌受损而引起 升高的改变 本文探讨表明，肺心病尤其是失代偿期患者，监 测五种血清酶活力的变化能反映其心肌受损的程度，对肺心病 的病情与预后判断也有一定的临床意义。 成细胞内酸中毒，使溶酶体膜不稳定，水解酶从溶酶体释出亦 可损伤细胞膜，使其通透性增高，当合并有酸中毒时， 甚至造 碡 ，２２一ｌｚ） 铺因 互，活性ＥＬ Ｒ彬．ｃＲ 种新的检测血 浆肝紊辅因子Ⅱ活性的 方法 福建省老年医院（３５。０ｏ３） 林建著 朱迎建√王鸿刮 Ｌ９８１年，Ｔｏｌｌｅｆｓｅｎ等首先报道肝素辅因子Ｉ（ＨＣ口），它 是血浆中抗凝血酶Ⅲ（ＡＴⅢ）外的另一种肝素侬赖性抗凝血 酶蛋白，是生理眭抗凝系统的一种新成分。本文建立丁酶联凝 固分析（ＥＬＣＡ）捡测ＨＣⅡ活性（ＨＣＩ ｌ ａ）的方法。 １ ＥＩ ＣＡ检测ＨＣＩ ｔ ａ的原理 体（ＦＭ），而ＦＭ有自动聚集的特性．将ＦＩＢ包被于酶标板， 加入辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的ＦＩＢ（ＦＩＢ Ｅ），再加入口 ａ，在Ｉ ａ作用下形成板结台的ＦＭ和游离酶标ＦＭ，后者自动 结合到前者上，其结合量与口ａ活性呈正相关。受检血浆中加 入处理过的硫酸皮肤紊（Ｄｓ），它特异地使Ｈｃ口活化，再ＮＡ． 纤维蛋白原（ＦＩＢ）可被凝血酶（Ｉ ａ）裂解为纤维蛋白单 适量的ｔ ａ，使其形成ＨｃⅡＩ ａ复合物，剩余ｌ ａ活性用ＦＩＢ一 维普资讯 http://www.cqvip.com
】２３ Ｅ检测，其活性高低与ＨＣＩ ｔ ａ呈负相关。 ２材料 参考血浆稀释成系列浓度，每一浓度做双扎重复。将ＨＣ Ｉ： ａ均值与相应的Ａ 均值怍统计回归处理ＨｃＩ：ａ在６ ２５ ２００％间，直接相关甚好，ｒ…０ ９９８ 特异性：ＦＩＢ为Ｉ ａ的 天然底物，故不存在非特异性反应。灵敏度：在线性范围内．本 法检测ＨＣ日：ａ的低限为６．２５ 。重复性：批内变异系数为 ３＋ａＸ，批间为５．２ 。正常参考值：用本法测定３８例正常人． 其血浆ＨＣ日：ａ值为ｌＯ１．９士１３ ９ ，范围７０～１３４ 。 ４讨论 参考血浆：３０个正常人枸椽酸钠抗凝的混合血浆。人口 （４ｕ／ｍ１）、ＦＩＢ（１ｇ／ｍ１）：购自上海生物翩品研究所。ＦＩＢ—Ｅ：按 Ｄｏｅｌｌｇａｓｔ方法标记 ］。ＤＳ：０．７５ｍｇ／ｍｌ，Ｓｉｇｍａ公司产品，用 前需经预处理口。冼液：１０ｍＭ Ｔｒｉｓ．１５０ｒａＭ Ｎａｃｌ，醋酸调 ｐＨ７．６。底物与终止液：ＥＬＩＳＡ法常规底物液与终止液。载体： ９６孔常规酶标板 ３方法和结果 ＥＬＣＡ法首先是Ｄｏｅｌｌｇａｓｔ于１９８５午提出，并被认为是检 ３．１采标奉方法：枸椽酸纳１：９抗凝血浆，一２０℃保存特测。 ３ ２ ＦＩＢ标记及降低ＨＲＰ与ＦＩＢ摩尔比（Ｅ／Ｐ）的方法：按 Ｄｏｅｌｌｇａｓｔ方法用ＨＲＰ标记ＦＩＢ（所得ＦＩＢ—Ｅ的Ｅ，Ｐ为０．６７）。 用２ｍｇ／ｍｌＦＩＢ稀释ＦＩＢ—Ｅ，使其Ｅ／Ｐ下降至所需的比值，然 后用２．５ｍｙ／ｍ１的ＢＳＡ将Ｆｍ—Ｅ调至１０ｕｇ／ｍｌ，此即为ＦＩＢ Ｅ应用漓。 测凝血酵敏感和特异的方法之一＿］一。本文建立ＥＬＣＡ法的目 是用此法检测ＨＣ口：ａ。最适条件为Ｅ／Ｐ＝０．０５，反应时间为 ｌ０分钟。凝血酶摄终浓度为０．５ｕ／ｍｌ，包被ＦＩＢ的浓度为 １０ｕｇ／ｍｌ。 肝紊可激活ＡＴ一豆而抑制Ｉ ａ，从而干扰本实验，商品化 的ＤＳ中有少量肝素类物质．故实验前需进行预处理以灭活肝 素ｔＡｂｉｄｇａａｒｄ＆ 用抗ＡＴ—Ｉ抗体处理血浆，抑翩血浆中ＡＴⅡ ３．３ ＥＬＣＡ检测Ｉ ａ的方法：ＦＩＢ（１０ｕｇ／ｌｍ１）包被酶标板 （１５０ｕｌ，＇孔）４℃过夜，甩掉包被液洗板后加ＦＩＢ Ｅ应用液 活性，在使用处理ＤＳ情况下，比较处理与不处理血浆对实验 结果的影响．发现两者无显著差异，说明ＤＳ经预处理后已不 具肝紊类物质活性。故本文选择处理ＤＳ而未处理血浆。国外 检测ＨｃＩ ｔ ａ常用发色底物法，本文将Ｄｏｅｌｌｇａｓｔ提出的检测 Ｉ ａ活性的ＥＬＣＡ法应用于ＨＣ日：ａ检测．所得结果令人满 意，不同稀释度及同一稀释度下的不同标本其批内、批间变异 系数稳定，线性范围内有６个血浆倍比稀释度（ＨＣⅡ：ａ从 ６．２５ ～２ｏ０ ）。与国外发色底物法线性范围一致 正常参考 值范围与国外报道的一致。由于ＥＬＣＡ法是以＿ａ的天然底物 ＦＩＢ作实验底物，与发色底物法相比具有更敏感和特异的优 点，且实验过程中经过洗板所得结果不受黄疸、脂血及溶血等 因素影响。试剂价格低廉，所用仪器设备简单。所以本文所设 计的ＥＬＣＡ法检测ＨｃＩ ｔ ａ是参考ｌ ００ｕｌ／孔（下称检测系统）。加不同稀释度ｌ ａ（作标准咀线）和 待测Ⅱａ５Ｏｕ１．／￣Ｌ，空白孔加５０ｕｌ洗液，３＇ＰＣ１０分钟，甩干洗板 ３次，每次５分钟。底物液１５０ｕｌ／孔，３７ Ｃ１ ５分钟；终止液５０ｕｌ／ 孔。酶标仪４９０ｎｍ读数。 ３．４ ＥＬＣＡ检测Ｉ ａ的最适条件选择：在ＦＩＢ包被旅度为 １０ｕｇ／ｍｌ情况下，测试ＦＩＢ－Ｅ的不同Ｅ／Ｐ与反应时间的组台。 结果当Ｅ／Ｐ ０．０５，反应时间为１０分钟时ｉ ａ浓度与相应Ａ 。 值相关性最好（ ０ ９９５）。此时Ａ‘ 值在２．０左右的最终Ｉ ａ 浓度为０．５ｕ／ｍ｜。 ３．５ ＥＬＣＡ检测ＨＣⅡ；ａ的方法：等量的Ｄｓ（０．７５ｍｙ／ｍ１） 与Ｉ．（３．？５ｕ／ｍＤ混匀，取混合液０．２ｍ１分别加入５０ｕｌ倍比 稀释的参考血浆（作标准曲线，即１：６０、１ １２０、１：２４０、ｌ ：４８０和１：９６０稀释度，设定１：６Ｏ稀释度血浆为１００ Ｈｃ 日：ａ，其余各稀释度ＨＣＩ ｔ ａ依次对应为５０％、２５ 、１２．５ 及６ ２５ ）和１：６０稀释的待测血浆中，混匀，３７℃６分钟。取 ５０ｕｌ加于检测系统，３７℃１０分钟，甩干洗渣洗板３次，每次５ 分钟。底物液１５０ｕｌ／孔，３７ｃ１５分钟。终止液５０ｕｌ／孔，酵标 仪４９０ｎｍ读各孔Ａ值。 ３ ６ ＥＩＣＡ检测ＨＣ Ｉ ａ方法的主要质量指标：线性试验：将 值得推广和实用的方法。 文献 ｉ Ｄｏｄｌｌｇａｓｔ ＧＪ，ｅｔ ａ１．Ｅｎｚｙｍｅ一［ｉｎｋｅｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ：Ａ ｃｌｏｔ，ｂａｓｅｄ， ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｒｏｍｈｉｎ．Ａｌ１ａ【Ｂｉｏｅｈｅｍ．１９８５，１４９：５２９２ Ａｂｉｌｄｇａａｒｄ Ｕ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓａｙ ｏｆ ｄｅｒｍａｔａｎ Ｓｕｌｆａｔｅ ｃｏ＇ａｃｔｏｒ（ｈｅｐａｒｉｎ ｃＤ＿ ｆａｃｔｏｒⅡ）ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ．１９８４．３５（３ ： ２５７． １４５倒载脂蛋白的检测报告 福州市晋安区医院齄骚科（３５００１４） 陈国珠 戴脂蛋白（Ａｐｏ）主要功能是维持脂蛋白结构和脂类运输， 调节脂代谢有关酵活力，以及作为细胞表面脂蛋白受体而参与 脂蛋白代谢，ＡｐｏＡ［、ＡｐｏＢ分别为ＨＤＬ和ＬＤＬ的主要成分。 ＡｐｏＡＩ降低与ＡｐｏＢ升高为动脉粥样硬化（Ａｓ）的重要指标。 血脂和血浆脂蛋白的紊乱是诱发冠心病发生的重要原因之一， 而载脂蛋白结构和功能改变叉常是血浆脂蛋白紊乱的原因，故 近年来对载脂蛋白进行许多研究，其中研究较多而又较重要是 ＡｐｏＡＩ和ＡｐｏＢ。载脂蛋白是比血脂更好地预测脂质代谢的变 化，因而ＡｐｏＡ［和ＡｐｏＢ及ＡｐｏＢ／＇ＡｐｏＡＩ检测将有助于探讨 脂质代谢紊乱的发病机理：我们采用免疫比浊法对１４５倒标本 进行血清载脂蛋白ＡＩ和Ｂ测定．现报告如下 ． １资料与方法 １．１测定对象：经我院门诊和住院的患者确谚为冠一１２＂病者４ｊ 倒，正常对照组为１００倒健康体检者。 １．２方法：应用美国ＭＥＴ－－ＡＳＣＡ全自动生化分析仪严格按 说明书进行操作，试剂由上海明华体外诊断试剂有限责任公司
