・８８・ 医药杂志２０１３年８月第２５卷第８期Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ Ｊ Ｃｈｉｎ ＰＬＡ，Ｖｏ１．２５，Ｎｏ．８，Ａｕｇ．２０１３ ・论著・ 高效液相色谱法单波长切换测定复方氯霉素醇溶液中 水杨酸、氯霉素的含量 王敏，张瑞麟，王逢春，李【摘要］ 目的胜 建立高效液相色谱法，单波长切换测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸、氯霉素的含量。方法 色 谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ—Ｃ， （４．６ ｍｍ×１５０ ｍｍ，５ Ｉｘｍ）；柱温：３０＂（２；流动相：甲醇一水（５５：４５）；流速：１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；检 测波长：３０３ ｎｍ（０～４ ｍｉｎ），２７８ ｎｍ（４～７ ｒａｉｎ）。结果水杨酸和氯霉素的线性范围为ｌ０．ｏ０～２００．０ ｇ／ｍｌ。平均回收 该方法操作简单、准确可靠， 率分别为９９．９０％、９９．７８％，相对标准偏差（ＲＳＤ）分别为０．８２％、０．９９％（／Ｚ＝６）。结论可缩短复方氯霉素醇溶液样品的检测时间，提高水杨酸、氯霉素含量测定结果的准确性。 ［关键词】 复方氯霉素醇；高效液相色谱法；单波长切换；含量测定 ［中国图书资料分类号］ Ｒ９４３．３ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］２０９５－１４０Ｘ（２０１３）０８－００８８－０３ 『ＤｏＩ］ １０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５．１４０Ｘ．２０１３．０８．０２６ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ Ｓｉｎｇｌｅ Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ Ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ ｉｎ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ｉｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ＷＡＮＧ Ｍｉｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｒｕｉ一１ｉｎ ，ＷＡＮＧ Ｆｅｎｇ—ｃｈｕｎ ，ＬＩ Ｓｈｅｎ￣（１．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，２６３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ， Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ａｒｅａ Ｃｏｍｍａｎｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０１ １４９，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓ— ｐｉｔａｌ ｏｆ Ａｉｒ Ｆｏｒｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１４２，Ｃｈｉｎａ；３．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＢｅｉｊｉｎｇ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ａｒｅａ Ｃｏｍｍａｎｄ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １００７００，Ｃｈｉｎａ；４．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐ，７３０８９ Ｔｒｏｏｐｓ，Ｘｕｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ ２２１００４，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ ｉｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃ０ｌ ｉｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃ０ｌ ａｌ— ｃｏｈｏｌｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ—Ｃ１８（４．６ ｍｍ ｘ １５０ ｍｍ，５ ｔｘｍ）ｏｆ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ３０℃：ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ（５５：４５），ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ ｍｌ／ ｍｉｎ：ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓ ｗｅｒｅ ３０３ ｎｍ（０－４ ｒａｉｎ）ａｎｄ ２７８ ａｍ（４－７ ｍｉｎ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｃｈｌｏｒａｍＤｈｅｎｉｃ０１ ｗａｓ ａｔ １０．００—２００．０ ｍｇ／ｍｌ，ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ９９．９０％ａｎｄ ９９．７８％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ａｎｄ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ）ｗｅｒｅ ０．８２％ａｎｄ ０．９９％（ｎ＝６）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍ— ｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｎｄ ｉｔ ｍａｙ ｓｈｏｒｔｅｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｃｈｌ０ｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ＿ ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ；Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ； Ｓｉｎｇｌｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ；Ａｓｓａｙｉｎｇ 复方氯霉素醇溶液是一种外用复方制剂，收载 于２００２年版的《中国人民医疗机构制剂规 范，》（以下简称《规范》） ，由水杨酸、氯霉素和 ７５％乙醇配制而成，用于治疗脂溢性皮炎、皮疹、瘙 测定氯霉素醇中水杨酸和氯霉素的含量，但方法有 一定的局限性，无法用于配备单波长的紫外检测器 的高效液相色谱仪 。本文采用单波长切换的高 效液相色谱法测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸和氯 霉素的含量，较已报道的方法更加简便、快捷，准确 度高，能更有效地控制复方氯霉素醇溶液的质量。 １仪器与试药 痒等。《规范》中采用中和滴定法和高效液相色谱 法分别测定溶液中水杨酸和氯霉素的含量，但在实 际工作中发现测定所需时间较长，造成生产效率较 低。目前，陆续有研究者报道采用高效液相色谱法 ［作者单位］ １０１１４９北京，北京军区总医院２６３临床部医 务处（王敏）；１００１４２北京，空军总医院药学部（张瑞麟）； １００７００北京，北京军区总医院医务处（王逢春）；２２１００４江苏 徐州，７３０８９卫生队（李胜） １．１仪器Ａｇｉｌｅｎｔ １２００型高效液相色谱仪（包括 四元泵、ＶＷＤ检测器、自动进样器、ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ化 学工作站）；Ｍｅｔｔｌｅｒ ＡＥ２４０电子天平（梅特勒公司）。 １．２ 试药 水杨酸对照品（中国食品药品检定研 究院，批号：１００１０６—２００３０３）；氯霉素对照品（中国食 医药杂志２０１３年８月第２５卷箜 ！ ！ 垒 ：箜： ： ： ｇ： ：璺 ： 品药品检定研究院，批号：１３０５５５－２００６０２）；复方氯 霉素醇溶液（北京军区总医院２６３临床部提供，批 １０ ｌ；检测时间：７ ｍｉｎ。 ２．２混合对照品溶液制备 精密称取氯霉素和水 杨酸对照品各１００ ｍｇ，置于１００ ｍｌ量瓶中，用水溶 号：２０１２０３２６、２０１２０６１７、２０１２１０２９）。甲醇为色谱 纯，冰醋酸为分析纯，水为重蒸馏水。 ２方法与结果 解并稀释至刻度，作为混合对照品储备液。 ２．３供试品溶液制备 精密量取复方氯霉素醇溶 液供试品１ ｍｌ，置于２００ ｍｌ量瓶中，加水稀释至刻 度，摇匀，０．２２ ｍ滤膜滤过，取续滤液，即得。精密 ２．１色谱条件 色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＸＤＢ—Ｃｌ８ （４．６ ｍｍ×１５０ ｍｍ，５ ｍ）；流动相：甲醇一水（５５： ４５）；流速：１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长：３０３ ｎｍ（０～ ４ ｍｉｎ），２７８ ｎｍ（４～７ ｍｉｎ）；柱温：３０％，进样量： 吸取１０ ｌ注入液相色谱仪，测定，即得液相色谱图 （图１）。 图１ 复方氯霉素醇溶液高效液相色谱图 Ａ．对照品溶液，Ｂ．供试品溶液，１．水杨酸，２．氯霉素 ２．４线性关系考察 精密量取混合对照品储备液 ０．１、０．２、０．５、１．０、１．５、２．０ ｍｌ，置于ｌ０ ｍｌ量瓶中， ２０１２０３２６），按“２．１”项下色谱条件，分别在０、２、４、 ８、１２、２４ ｈ各进样１次，测定峰面积。结果水杨酸峰 面积的ＲＳＤ为０．５３％（ｎ＝６），氯霉素峰面积的 ＲＳＤ为０．８２％（ｎ＝６），表明供试品溶液在２４ ｈ内 稳定性良好。 加水稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的系列对照品 溶液。按“２．１”项下色谱条件分别进样，测定峰面 积。分别以水杨酸及氯霉素的浓度（ｇ／ｍ１）为横坐 标（Ｘ），以其各自的峰面积积分值为纵坐标（Ｙ），绘 制标准曲线。得回归方程为水杨酸：Ｙ＝２０．２２Ｘ＋ ０．１７６９（ｒ＝０．９９９９，ｎ＝６）；氯霉素：Ｙ＝２４．９７Ｘ＋ ０．２４１８（ｒ＝０．９９９９，ｎ＝６）。结果表明，水杨酸和氯 ２．７重复性试验 取批号为２０１２０３２６的样品６ 份，按“２．３”项下方法制备供试品溶液，按“２．１”项 下色谱条件，分别进样测定。结果水杨酸的平均含 量为２．０２％，ＲＳＤ为０．７８％（ｎ＝６），氯霉素的平均 含量为１．９７％，ＲＳＤ为０．９８％（ｎ＝６），表明方法的 重复性良好。 霉素在１０．００～２００．０ ｇ／ｍｌ范围内与其各自的峰面 积线性关系良好。 ２．５精密度试验精密吸取１００．０ ｇ／ｍｌ混合对照 ２．８ 回收率试验 精密量取水杨酸和氯霉素对照 品，按复方氯霉素醇溶液处方配成８０、１００、１２０ ｇ／ｍｌ 品溶液，按“２．１”项下色谱条件，连续进样６次，测 定峰面积。结果水杨酸峰面积ＲＳＤ为０．７４％（ｎ＝ ３个浓度水平的样品溶液，每个浓度各分别制备３ 份供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，计算氯 霉素和水杨酸的含量回收率，结果见表１。 ６），氯霉素峰面积ＲＳＤ为０．５４９０（ｎ＝６），表明仪器 的精密度良好。 ２．６ 稳定性试验 取供试品溶液（批号： 表１ 复方氯霉素醇溶液加样回收率试验结果（ｎ＝６） ・９０・ 医药杂志２０１３年８月第２５卷第８期Ｍｅｄ＆Ｐｈａｒｍ Ｊ Ｃｈｉｎ ＰＬＡ，Ｖｏ１．２５。Ｎｏ．８．Ａｕｇ．２０１３ ２．９ 样品含量测定 取批号为２０１２０３２６、 ２０１２０６１７、２０１２１０２９的３份样品，按“２．３”项下方法 制备供试品溶液，按“２．１”项下色谱条件，分别进样 测定，结果样品中水杨酸的含量分别为２．０２％、 ２．０４％、２．０７％，氯霉素的含量分别为１．９７％、 ２．０１％、２．０６％ ３讨论 目前，高效液相色谱法已广泛应用于各种制剂 的含量检测，保证了制剂在临床使用中的安全性和 有效性 。本文采用高效液相色谱法单波长切换 测定复方氯霉素醇溶液中水杨酸和氯霉素的含量， 方法简单快捷、准确度高。 《规范》中原有的复方氯霉素醇溶液中水杨酸 的含量测定采用了滴定法，氯霉素的含量测定采用 了高效液相色谱法，测定氯霉素的含量通常需要约 ３０ ｍｉｎ，而本实验条件的检测时间仅为７ ｍｉｎ，缩短 了样品检测时间，可以同时完成水杨酸和氯霉素的 含量测定。而且，色谱峰型和理论塔板数均较理想， 能够达到复方氯霉素醇溶液质量控制的要求。 水杨酸和氯霉素的最大吸收波长分别为３０３ ｎｍ和２７８ ｎｍ ，通常无法在配备紫外检测器的高 效液相色谱仪上同时进行含量测定。紫外检测器一 般只能在某一固定波长下测定单一组分的含量，对 于多成分的同时测定往往无法实现 。如果使用 多波长检测器，对仪器的要求较高，且方法准确度相 对较低。本试验通过采用单波长切换的方法，使用 紫外检测器分别在水杨酸和氯霉素的最大吸收波长 处测定其含量，具有较高的灵敏度，对仪器的要求较 低，具有较高的应用推广价值。 ［参考文献］ 中国人民总后勤部卫生部．中国人民医 疗机构制剂规范（２００２年版）［Ｍ］．北京：人民军医出 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（收稿时间：２０１３—０５—１０修回时间：２０１３—０５—３０）
